Cell Total RNA Isolation Kit Kompleti za popolno izolacijo RNA iz celice
Opis
Ta komplet uporablja vrtljivo kolono in formulo, ki ju je razvil Foregene, ki lahko učinkovito ekstrahira visoko čisto in visokokakovostno celotno RNK iz celic, gojenih v ploščah s 96, 24, 12 in 6 vdolbinicami.
Komplet zagotavlja učinkovito kolono za čiščenje DNK, ki zlahka loči supernatant in celični lizat, veže in odstrani genomsko DNK.Operacija je preprosta in prihrani čas.
TKolona samo za RNA lahko učinkovito veže RNA z edinstveno formulo.Hkrati je mogoče obdelati veliko število vzorcev.
Sestavni deli kompleta
Sestava kompleta | RE-03111 | RE-03114 |
50 T | 200 T | |
Medpomnilnik cRL1* | 25 ml | 100 ml |
Medpomnilnik cRL2 | 15 ml | 60 ml |
Medpomnilnik RW1* | 25 ml | 100 ml |
Medpomnilnik RW2 | 24 ml | 96 ml |
ddH2O brez RNaze | 10 ml | 40 ml |
Stolpec samo RNA | 50 | 200 |
Kolona za čiščenje DNK | 50 | 200 |
Navodilo | 1 | 1 |
* Prosimo, da med delovanjem nosite rokavice in upoštevate zaščitne ukrepe, saj pufer cRL1 in pufer RW1 vsebujeta dražilne kaotropne soli.
Značilnosti in prednosti
■ Celoten postopek poteka pri sobni temperaturi (15-25 ℃), brez ledene kopeli in nizkotemperaturnega centrifugiranja.
■ Celoten komplet je brez RNAse, zato vam ni treba skrbeti za razgradnjo RNA.
■ DNA-Cleaning Column specifično veže DNA, tako da lahko komplet odstrani kontaminacijo genomske DNA brez dodajanja dodatne DNaze.
■ Visok izkoristek RNA: kolona samo za RNA in edinstvena formula lahko učinkovito očistita RNA.
■ Hitra hitrost: enostavno upravljanje in dokončanje v 11 minutah.
■ Varnost: organski reagent ni potreben.
■ Visoka kakovost: prečiščena RNA je visoke čistosti, brez beljakovin in drugih nečistoč ter je primerna za različne nadaljnje poskuse.
Aplikacija kompleta
Primeren je za ekstrakcijo in čiščenje celotne RNA iz gojenih celic v ploščah s 96, 24, 12 in 6 jamicami.
Potek dela
Diagram
Diagram baterije v agaroznem gelu Cell Total RNA Isolation Kit je obdelal zgornje različno število celic, 20 μl volumske elucije, vzemite 2 μl prečiščene skupne RNA 1 %.
Shranjevanje in rok uporabnosti
Komplet lahko hranite 12 mesecev pri sobni temperaturi (15–25 ℃) ali 2–8 ℃ za daljši čas (24 mesecev).
Pufer cRL1 lahko hranite pri 4 ℃ 1 mesec po dodajanju 2-hidroksi-1-etantiola (neobvezno).
RNA ni ekstrahirana ali pa je izkoristek RNA nizek
Pogosto obstajajo številni dejavniki, ki vplivajo na učinkovitost predelave, kot so: vsebnost RNA v vzorcu tkiva, način delovanja, volumen elucije itd.
1. Med delovanjem je bilo izvedeno ledeno kopel ali kriogeno (4 °C) centrifugiranje.
Priporočilo: Delujte pri sobni temperaturi (15-25 °C) skozi celoten postopek, ne uporabljajte ledene kopeli in centrifugirajte pri nizkih temperaturah.
2. Nepravilno konzerviranje vzorca ali predolg čas shranjevanja vzorca.
Priporočilo: Vzorce hranite pri -80 °C ali zamrznite v tekočem dušiku in se izogibajte ponavljajoči se uporabi pri zamrzovanju in odmrzovanju;poskusite uporabiti sveže tkivo ali gojene celice za ekstrakcijo RNK.
3. Nezadostna liza vzorca.
Priporočilo: Pri homogenizaciji tkiva zagotovite, da je tkivo dovolj homogenizirano in da so tkivne celice dovolj razcepljene, da pojasnite sproščanje RNK.
4. Eluent ni pravilno dodan.
Priporočilo: Potrdite, da je ddH brez RNaze2O dodamo po kapljicah na sredino membrane čistilne kolone.
5. Pufru RL2 ali pufru RW2 ni bil dodan pravilen volumen absolutnega etanola.
Priporočilo: Sledite navodilom, dodajte ustrezno količino absolutnega etanola v pufer RL2 in pufer RW2 ter dobro premešajte pred uporabo kompleta.
6. Odmerjanje vzorca tkiva ni primerno.
Priporočilo: Uporabite 10-20 mg tkiva ali (1-5) × 106celic na 500 μl pufra RL1, saj lahko prekomerna uporaba tkiva povzroči zmanjšano ekstrakcijo RNA.
7. Neustrezna količina elucije ali nepopolna elucija.
Priporočilo: Volumen elucije čistilne kolone je 50-200 μl;če učinek elucije ni zadovoljiv, je priporočljivo podaljšati čas namestitve pri sobni temperaturi po dodajanju predhodno segretega ddH brez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Čistilna kolona ima ostanek etanola po pranju s pufrom RW2.
Priporočilo: Če po izpiranju pufra RW2 ostane ostanek etanola, prazne epruvete centrifugirajte 1 minuto, čas za operacijo centrifugiranja praznih epruvet lahko podaljšate na 2 minuti ali pa čistilno kolono postavite na sobno temperaturo za 5 minut, da ustrezno odstranite preostali etanol.
Očiščena RNA se razgradi
Kakovost očiščene RNA je povezana z dejavniki, kot so ohranitev vzorca, kontaminacija z RNazo in manipulacija itd.
1. Vzorci tkiv se ne hranijo pravočasno.
Priporočilo: Če vzorcev tkiva ali celic po odvzemu ne uporabite pravočasno, jih takoj kriokonzervirajte pri -80 °C ali v tekočem dušiku.Če želite ekstrahirati RNK, uporabite na novo odvzet vzorec tkiva ali celice, kadar koli je to mogoče.
2. Ponavljajoče zamrzovanje-odmrzovanje vzorcev tkiva.
Priporočilo: Pri shranjevanju vzorcev tkiv je najbolje, da jih razrežete na majhne koščke za konzerviranje in odstranite enega od kosov, ko jih uporabljate, da se izognete ponavljajočemu zamrzovanju-odmrzovanju vzorca in razgradnji RNK.
3. RNazo vnašamo ali med operacijo ne nosimo rokavic za enkratno uporabo, maske itd.
Priporočilo: Eksperimente z ekstrakcijo RNK je najbolje izvajati v ločenih prostorih za manipulacijo RNK, pred poskusom pa je miza počiščena.
Med poskusom nosite rokavice in maske za enkratno uporabo, da zmanjšate razgradnjo RNK, ki jo povzroči vnos RNaze.
4. Reagenti so med uporabo kontaminirani z RNazo.
Priporočilo: zamenjajte z novim kompletom za izolacijo celotne živalske RNA za sorodne poskuse.
5. Centrifugalne epruvete, konice itd., ki se uporabljajo pri manipulaciji z RNK, so kontaminirane z RNazo.
Priporočilo: Potrdite, da centrifugalne epruvete, konice, pipete itd., ki se uporabljajo pri ekstrakciji RNK, ne vsebujejo RNaze.
Prečiščena pridobljena RNA vpliva na nadaljnje poskuse
RNA, prečiščena s čistilno kolono, če je vsebnost solnih ionov, beljakovin prevelika, bo vplivala na spodnji poskus, kot je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluirana RNA ima ostanke solnih ionov.
Priporočilo: potrdite, da je bila pufru RW2 dodana ustrezna prostornina etanola, in izvedite 2 izpiranji čistilne kolone pri centrifugalni hitrosti, ki je navedena za delovanje;če je kakršen koli ostanek solnih ionov, pustite čistilno kolono pufru RW2 5 minut pri sobni temperaturi in izvedite centrifugiranje, da povečate odstranitev kontaminacije s soljo.
2. Ostanek etanola v eluirani RNA.
Priporočilo: potrdite, da po izpiranju pufra RW2 izvedite operacijo centrifugiranja prazne epruvete pri hitrosti centrifugiranja, ki je navedena za delovanje, podaljšajte čas operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minuti, če je še vedno ostanek etanola, ali pustite na sobni temperaturi 5 m