Razlaga osnovnih izrazov molekularne biologije
1. cDNA in cccDNA: cDNA je dvoverižna DNA, sintetizirana z reverzno transkriptazo iz mRNA;cccDNA je plazmidna dvoverižna zaprta krožna DNA brez kromosoma.
2. Standardna zgibna enota: beljakovinska sekundarna strukturna enota α-vijačnica in β-list lahko tvorita strukturne bloke s posebnimi geometrijskimi razporeditvami prek različnih povezovalnih polipeptidov.To vrsto določenega zgibanja običajno imenujemo super sekundarna struktura.Skoraj vse terciarne strukture je mogoče opisati s temi zgibnimi tipi in celo njihovimi kombiniranimi tipi, zato jih imenujemo tudi standardne zgibne enote.
3. CAP: ciklični adenozin monofosfat (cAMP) receptorski protein CRP (cAMP receptorski protein), kompleks, ki nastane po kombinaciji cAMP in CRP, se imenuje aktivacijski protein CAP (cAMP aktivirani protein)
4. Palindromsko zaporedje: obratno komplementarno zaporedje segmenta fragmenta DNA, pogosto mesto restrikcijskega encima.
5. micRNA: komplementarna interferenčna RNA ali protismiselna RNA, ki je komplementarna zaporedju mRNA in lahko zavira prevajanje mRNA.
6. Ribozim: RNA s katalitično aktivnostjo, ki ima avtokatalitično vlogo v procesu spajanja RNA.
7. Motiv: V prostorski strukturi proteinskih molekul je nekaj lokalnih regij s podobno tridimenzionalno obliko in topologijo
8. Signalni peptid: peptid s 15-36 aminokislinskimi ostanki na N-koncu med sintezo proteina, ki vodi transmembrano proteina.
9. Attenuator: Nukleotidno zaporedje med operatersko regijo in strukturnim genom, ki prekine transkripcijo.
10. Čarobna točka: Ko bakterije rastejo in naletijo na popolno pomanjkanje aminokislin, bodo bakterije sprožile nujni odziv in ustavile izražanje vseh genov.Signala, ki ustvarjata ta odziv v sili, sta gvanozin tetrafosfat (ppGpp) in gvanozin pentafosfat (pppGpp).Vloga PpGpp in pppGpp ni samo en ali nekaj operonov, ampak vpliva na veliko število le-teh, zato jih imenujemo superregulatorji ali čarobne točke.
11. Upstream promotorski element: nanaša se na zaporedje DNA, ki igra regulativno vlogo pri aktivnosti promotorja, kot je TATA v regiji -10, TGACA v regiji -35, ojačevalci in dušilci.
12. DNK sonda: označen segment DNK z znanim zaporedjem, ki se pogosto uporablja za odkrivanje neznanih zaporedij in pregledovanje ciljnih genov.
13. SD zaporedje: Je vezavno zaporedje ribosoma in mRNA, ki uravnava prevajanje.
14. Monoklonsko protitelo: protitelo, ki deluje samo proti eni sami antigenski determinanti.
15. Kozmid: je umetno zgrajen eksogeni vektor DNA, ki zadrži regije COS na obeh koncih faga in je povezan s plazmidom.
16. Pregled modro-belih madežev: gen LacZ (ki kodira β-galaktozidazo), encim lahko razgradi kromogeni substrat X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indol-β-D-galaktozid), da proizvede modro barvo, zaradi česar je sev moder.Ko je eksogena DNA vstavljena, se gen LacZ ne more izraziti in sev je bel, da se pregledajo rekombinantne bakterije.To se imenuje modro-belo presejanje.
17. Cis-delujoči element: specifično zaporedje baz v DNK, ki uravnava izražanje genov.
18. Encim Klenow: Velik fragment DNA polimeraze I, le da je aktivnost 5' 3' eksonukleaze odstranjena iz holoencima DNA polimeraze I
19. Zasidran PCR: uporablja se za pomnoževanje zanimive DNK z znanim zaporedjem na enem koncu.Rep poli-dG je bil dodan na en konec neznanega zaporedja, nato pa sta bila poli-dC in znano zaporedje uporabljena kot primerja za pomnoževanje PCR.
20. Fuzijski protein: Gen evkariontskega proteina je povezan z eksogenim genom, protein, sestavljen iz prevoda originalnega genskega proteina in eksogenega proteina, se izraža istočasno.
Drugi izrazi molekularne biologije
1. Fizični zemljevid DNK je vrstni red, v katerem so razporejeni (z restrikcijsko endonukleazo prebavljeni) fragmenti molekule DNK.
2. Cepitev RNaze je razdeljena na dve vrsti (avtokataliza) in (heterokataliza).
3. Pri prokariontih obstajajo trije iniciacijski faktorji: (IF-1), (IF-2) in (IF-3).
4. Transmembranski proteini potrebujejo vodenje (signalni peptidi), vloga proteinskih spremljevalcev pa je (pomaga pri zvijanju peptidne verige v nativno konformacijo proteina).
5. Elemente v promotorjih lahko na splošno razdelimo na dve vrsti: (jedrni promotorski elementi) in (navzgornji promotorski elementi).
6. Raziskovalna vsebina molekularne biologije v glavnem vključuje tri dele: (strukturna molekularna biologija), (ekspresija in regulacija genov) in (tehnologija rekombinacije DNK).
7. Dva ključna poskusa, ki dokazujeta, da je DNK genetski material, sta (okužba miši s pnevmokokom) in (okužba s fagom T2 Escherichia coli).potencial).
8. Obstajata dve glavni razliki med hnRNA in mRNA: (hnRNA je spojena v procesu pretvorbe v mRNA), (5' koncu mRNA je dodan pokrovček m7pGppp, na 3' koncu repa kisline mRNA (polyA) pa je dodatna poliadenilacija).
9. Prednosti večpodenotne oblike beljakovin so (podenota je ekonomična metoda za uporabo DNA), (lahko zmanjša vpliv naključnih napak v sintezi beljakovin na aktivnost beljakovin), (aktivnost se lahko zelo učinkovito in hitro odpre in zapre).
10. Glavna vsebina mehanizma zvijanja beljakovin prva teorija nukleacije vključuje (nukleacijo), (strukturno obogatitev), (končno preureditev).
11. Galaktoza ima dvojni učinek na bakterije;na eni strani (lahko se uporablja kot vir ogljika za rast celic);na drugi strani (je tudi sestavni del celične stene).Zato je za trajno sintezo na ravni ozadja potreben od cAMP-CRP neodvisen promotor S2;istočasno je za uravnavanje sinteze na visoki ravni potreben od cAMP-CRP odvisen promotor S1.Transkripcija se začne od (S2) z G in od (S1) brez G.
12. Tehnologija rekombinantne DNA je znana tudi kot (kloniranje genov) ali (molekularno kloniranje).Končni cilj je (prenos genetske informacije DNK iz enega organizma v drug organizem).Tipičen poskus rekombinacije DNA običajno vključuje naslednje korake: (1) Ekstrahirajte ciljni gen (ali eksogeni gen) donorjevega organizma in ga encimsko povežite z drugo molekulo DNA (vektor za kloniranje), da tvorite novo molekulo rekombinantne DNA.② Molekula rekombinantne DNA se prenese v prejemno celico in podvoji v prejemni celici.Ta proces se imenuje transformacija.③ Pregledajte in identificirajte tiste prejemne celice, ki so absorbirale rekombinantno DNA.④Gojite celice, ki vsebujejo rekombinantno DNA v velikih količinah, da odkrijete, ali je gen tuje pomoči izražen.
13. Obstajata dve vrsti podvajanja plazmidov: tisti, ki jih striktno nadzoruje sinteza beljakovin v gostiteljski celici, se imenujejo (tesni plazmidi), tisti, ki niso strogo nadzorovani s sintezo proteinov v gostiteljski celici, pa se imenujejo (sproščeni plazmidi).
14. Reakcijski sistem PCR mora imeti naslednje pogoje: a.Primerji DNK (približno 20 baz) s komplementarnimi sekvencami na vsakem koncu dveh verig ciljnega gena, ki jih je treba ločiti.b.Encimi s toplotno stabilnostjo, kot so: TagDNA polimeraza.c, dNTPd, zanimivo zaporedje DNA kot predloga
15. Osnovni reakcijski proces PCR vključuje tri stopnje: (denaturacija), (žarjenje) in (podaljšanje).
16. Osnovni postopek transgenih živali običajno vključuje: ①Vnos kloniranega tujega gena v jedro oplojenega jajčeca ali embrionalne matične celice;②Presaditev inokuliranega oplojenega jajčeca ali embrionalne izvorne celice v žensko maternico;③Popoln embrionalni razvoj in rast Za potomce s tujimi geni;④ Uporabite te živali, ki lahko proizvedejo tuje beljakovine, kot vzrejo za vzrejo novih homozigotnih linij.
17. Hibridomske celične linije nastanejo s hibridizacijo celic (vranice B) s celicami (mieloma) in ker (vranične celice) lahko izkoristijo hipoksantin in (kostne celice) zagotovijo funkcije celične delitve, jih je mogoče gojiti v mediju HAT.rasti.
18. S poglabljanjem raziskovanja se prva generacija protiteles imenuje (poliklonska protitelesa), druga generacija (monoklonska protitelesa) in tretja generacija (gensko inženirska protitelesa).
19. Trenutno je genetski inženiring virusov žuželk usmerjen predvsem na bakulovirus, kar se kaže v vnosu (eksogenega toksinskega gena);(geni, ki motijo normalen življenjski cikel žuželk);(spreminjanje virusnih genov).
20. Transaktivni proteinski faktorji, ki ustrezajo skupnim elementom TATA, GC in CAAT v promotorju RNA polimeraze II pri sesalcih, so (TFIID), (SP-1) oziroma (CTF/NF1).
enaindvajset.Osnovni transkripcijski faktorji RNA polimeraze Ⅱ so TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, njihovo vezavno zaporedje pa je: (D, A, B, E).Pri čemer je funkcija TFII-D (vezava na polje TATA).
dvaindvajset.Večina transkripcijskih faktorjev, ki se vežejo na DNK, deluje v obliki dimerjev.Funkcionalne domene transkripcijskih faktorjev, ki se vežejo na DNK, so običajno naslednje (vijačnica-obrat-vijačnica), (motiv cinkovega prsta), (bazični-levcin) motiv zadrge).
triindvajset.Obstajajo tri vrste načinov cepitve z restrikcijsko endonukleazo: (rez na strani 5' simetrijske osi, da se ustvarijo 5' lepljivi konci), (rez na strani 3' simetrijske osi, da se ustvarijo 3' lepljivi konci (rez na simetrični osi, da se ustvarijo ravni segmenti) ).
štiriindvajset.Plazmidna DNA ima tri različne konfiguracije: (SC konfiguracija), (oc konfiguracija), (L konfiguracija).Prva pri elektroforezi je (SC konfiguracija).
25. Eksogeni sistemi za izražanje genov, predvsem (Escherichia coli), (kvasovke), (žuželke) in (tabela celic sesalcev).
26. Običajno uporabljene metode za transgene živali so: (metoda retrovirusne okužbe), (metoda mikroinjiciranja DNK), (metoda embrionalnih matičnih celic).
Uporaba Molekularna biologija
1. Poimenujte funkcije več kot 5 RNA?
Prenosna RNA tRNA Prenosna aminokislina Ribosomska RNA rRNA Ribosom sestavlja messenger RNA mRNA Predloga za sintezo beljakovin Heterogena jedrska RNA hnRNA Prekurzor zrele mRNA majhna jedrska RNA snRNA Vključena v spajanje hnRNA Majhna citoplazemska RNA scRNA/7SL-RNA protein Plazemski retikulum lokaliziran in sintetiziran za prepoznavanje signala komponente telesa Protismiselne RNA anRNA/micRNA Uravnava izražanje genov Ribozyme RNA Encimsko aktivna RNA
2. Kakšna je glavna razlika med prokariontskimi in evkariontskimi promotorji?
Prokariontski TTGACA --- TATAAT------Iniciacijsko mesto-35 -10 Evkariontski ojačevalec---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Iniciacijsko mesto-110 -70 -25
3. Kateri so glavni vidiki umetne konstrukcije naravnih plazmidov?
Naravni plazmidi imajo pogosto napake, zato niso primerni za uporabo kot nosilci za genski inženiring, zato jih je treba modificirati in konstruirati: a.Dodajte ustrezne izbirne označevalne gene, na primer dva ali več, ki jih je enostavno uporabiti za selekcijo, običajno antibiotične gene.b.Povečajte ali zmanjšajte primerna mesta rezanja encimov, da olajšate rekombinacijo.c.Skrajšajte dolžino, odrežite nepotrebne drobce, izboljšajte učinkovitost uvoza in povečajte nosilnost.d.Spremenite replikon, iz tesnega v ohlapen, z manj kopij na več kopij.e.Dodajte posebne genetske elemente glede na posebne zahteve genskega inženiringa
4. Navedite primer metode za diferencialno presejanje tkivno specifične cDNA?
Pripravimo dve celični populaciji, ciljni gen je izražen ali močno izražen v eni od celic, ciljni gen pa ni izražen ali je nizko izražen v drugi celici, nato pa ciljni gen najdemo s hibridizacijo in primerjavo.Na primer, med pojavom in razvojem tumorjev bodo tumorske celice predstavljale mRNA z različnimi stopnjami izražanja kot normalne celice.Zato je mogoče gene, povezane s tumorjem, presejati z diferencialno hibridizacijo.Indukcijsko metodo lahko uporabimo tudi za odkrivanje genov, katerih izražanje je inducirano.
5. Generiranje in presejanje hibridomskih celičnih linij?
Vranične celice B + mielomske celice, dodajte polietilen glikol (PEG) za spodbujanje celične fuzije in fuzijske celice vraničnega B-mieloma, gojene v mediju HAT (ki vsebuje hipoksantin, aminopterin, T), se še naprej širijo in hranijo.Celična fuzija vsebuje: celice vranice in vranice: ne morejo rasti, celic vranice ni mogoče gojiti in vitro.Fuzijske celice kosti in kosti: ne morejo uporabiti hipoksantina, lahko pa sintetizirajo purin po drugi poti z uporabo folne reduktaze.Aminopterin zavira folno reduktazo in zato ne more rasti.Celice fuzije kosti in vranice: lahko rastejo v HAT, celice vranice lahko uporabljajo hipoksantin, kostne celice pa zagotavljajo funkcijo celične delitve.
6. Kakšen je princip in metoda določanja primarne strukture DNK z metodo dideoksi terminalne terminacije (Sangerjeva metoda)?
Načelo je uporaba terminatorja nukleotidne verige – 2,,3,-dideoksinukleotida za prekinitev podaljška DNK.Ker nima 3-OH, ki je potreben za tvorbo 3/5/fosfodiestrskih vezi, potem ko je vključen v verigo DNK, verige DNK ni mogoče nadalje razširiti.V skladu z načelom združevanja baz, kadar DNA polimeraza potrebuje dNMP za sodelovanje v normalno podaljšani verigi DNA, obstajata dve možnosti, ena je sodelovanje pri ddNTP, kar ima za posledico prekinitev podaljšanja deoksinukleotidne verige;drugi je sodelovanje v dNTP, tako da se lahko veriga DNK še naprej razteza, dokler se ne vključi naslednji ddNTP.Po tej metodi lahko dobimo skupino različno dolgih fragmentov DNA, ki se končajo na ddNTP.Metoda je razdelitev v štiri skupine oziroma ddAMP, ddGMP, ddCMP in ddTMP.Po reakciji lahko elektroforeza s poliakrilamidnim gelom prebere zaporedje DNK glede na plavalne trakove.
7. Kakšen je pozitiven regulacijski učinek aktivatorskega proteina (CAP) na transkripcijo?
Ciklični adenilat (cAMP) receptorski protein CRP (cAMP receptorski protein), kompleks, ki ga tvori kombinacija cAMP in CRP, se imenuje CAP (cAMP aktivirani protein).Ko E. coli gojimo v mediju brez glukoze, se poveča sinteza CAP, CAP pa ima funkcijo aktiviranja promotorjev, kot je laktoza (Lac).Nekateri promotorji, odvisni od CRP, nimajo tipične značilnosti zaporedja regije -35 (TTGACA), ki jo imajo običajni promotorji.Zato se RNA polimeraza težko veže nanj.Prisotnost CAP (funkcija): lahko bistveno izboljša vezavno konstanto encima in promotorja.V glavnem prikazuje naslednja dva vidika: ① CAP pomaga molekuli encima, da se pravilno orientira s spreminjanjem konformacije promotorja in interakcije z encimom, tako da se združi z regijo -10 in igra vlogo zamenjave funkcije regije -35.②CAP lahko tudi zavira vezavo RNA polimeraze na druga mesta v DNK in s tem poveča verjetnost vezave na njen specifični promotor.
8. Kateri koraki so običajno vključeni v tipičen poskus rekombinacije DNK?
a.Ekstrahirajte ciljni gen (ali eksogeni gen) organizma darovalca in ga encimsko povežite z drugo molekulo DNK (vektor za kloniranje), da tvorite novo molekulo rekombinantne DNK.b.Prenesite molekulo rekombinantne DNA v prejemno celico ter jo podvojite in ohranite v prejemni celici.Ta proces se imenuje transformacija.c.Pregledajte in identificirajte tiste prejemne celice, ki so absorbirale rekombinantno DNA.d.Množično gojite celice, ki vsebujejo rekombinantno DNA, da odkrijete, ali je gen tuje pomoči izražen.
9. Izdelava genske knjižnice Podane so tri metode za presejanje rekombinantov in postopek je na kratko opisan.
Preverjanje odpornosti na antibiotike, insercijska inaktivacija odpornosti, presejanje modro-belih madežev ali PCR presejanje, diferencialno presejanje, DNA sonda Večina vektorjev za kloniranje nosi gene za odpornost na antibiotike (anti-ampicilin, tetraciklin).Ko se plazmid prenese v Escherichia coli, bodo bakterije pridobile odpornost, tiste brez prenosa pa ne bodo imele odpornosti.Vendar ne more razločiti, ali je bil reorganiziran ali ne.Če je v vektorju, ki vsebuje dva gena za odpornost, v enega od genov vstavljen fragment tuje DNA in povzroči inaktivacijo gena, se lahko uporabita dve kontrolni plošči, ki vsebujeta različni zdravili, za pregledovanje pozitivnih rekombinantov.Na primer, plazmid pUC vsebuje gen LacZ (ki kodira β-galaktozidazo), ki lahko razgradi kromogeni substrat X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indol-β-D-galaktozid), da proizvede modro barvo, s čimer se sev obarva modro.Ko je tuja DNK vstavljena, se gen LacZ ne more izraziti in sev je bel, da se pregledajo rekombinantne bakterije.
10. Pojasnite osnovni postopek pridobivanja transgenih živali preko embrionalnih izvornih celic?
Embrionalne matične celice (ES) so embrionalne celice med embrionalnim razvojem, ki jih je mogoče umetno gojiti in razmnoževati ter imajo funkcijo diferenciacije v druge vrste celic.Kultura celic ES: notranjo celično maso blastociste izoliramo in gojimo.Ko je ES gojen v plasti brez hranilnikov, se bo diferenciral v različne funkcionalne celice, kot so mišične celice in celice N.Pri gojenju v mediju, ki vsebuje fibroblaste, bo ES ohranil funkcijo diferenciacije.ES je mogoče genetsko manipulirati in njegovo diferenciacijsko funkcijo je mogoče integrirati, ne da bi to vplivalo na njegovo diferenciacijsko funkcijo, kar rešuje problem naključne integracije.Vnesite eksogene gene v embrionalne matične celice, nato jih implantirajte v maternico brejih samic miši, se razvijejo v mladiče in križajo, da dobite homozigotne miši.
