W:Brother, reverzna transkripcija je končana in končno zadnji korak – fluorescenčna kvantitativna PCR!Hej, brat, kaj je kvantitativna PCR v realnem času?
M:PCR vedno veš, kajne?
W: Veste, PCR je verižna reakcija s polimerazo in je tehnologija, ki poveča DNK!
M: Skoraj ... To je tehnična metoda za več kot milijonkratno pomnoževanje ciljnega zaporedja s posebnimi primerji, vendar to samo kaže na prisotnost ali odsotnost ciljnega zaporedja in ne more določiti količine začetne predloge.Fluorescenčni kvantitativni PCR je tehnična metoda, razvita za reševanje tega problema.PCR v realnem času in količinski PCR (qPCR) se na splošno nanašata nanj.
W: Razlika od navadne PCR je v kvantifikaciji fluorescence?
M: Da, to pomeni, da je v podaljšani fazi vsakega cikla PCR zaznana intenzivnost fluorescenčnega signala in začetno količino predloge je mogoče izračunati glede na spremembo intenzitete signala.
W: Zdi se tako zapleteno!Ali moram to izračunati sam?
M: To zahteva, da se učiš počasi, najbolje je, da lahko razumeš načelo.Zdaj se lahko najprej osredotočite na vrednost CT, ki je relativno intuitiven eksperimentalni podatek, njegova velikost pa ustreza velikosti začetne količine predloge.Obstajajo tudi grafi, kot so krivulje ojačanja in krivulje taljenja.Imajo zadnjo besedo o tem, ali je vaš poskus uspešen ali ne.
W: Oh, brat.Potem bom naredil poskus qPCR!
M: Bodite posebno pozorni, da ne dodate šablon v območje reagenta, sicer se bo vaša neuporabljena mešanica zlahka kontaminirala!
W: Razumem!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Večja učinkovitost, večja specifičnost
Visoka občutljivost, dobra združljivost