Uvod:

RNA, znanstveno ime ribonukleinska kislina, njena okrajšava izhaja iz ribonukleinske kisline, je vrsta nukleinske kisline, ki nastane s povezovanjem vsaj desetine ribonukleotidov s pomočjo fosfodiestrskih vezi.

Predpostavka raziskovanja RNK je pridobivanje celotne RNK brez onesnaženja, osnovno načelo ekstrakcije RNK pa lahko v grobem povzamemo na naslednji način:

1. Najprej uničite celice

2. Nato odstranite makromolekularne nečistoče (proteine, lipide, DNK itd.)

3. Končno se RNA obori, medtem ko se odstranijo soli in organska topila ter dodatno očisti RNA

Preteklost in sedanjost metode pridobivanja

Prva generacija metode ekstrakcije RNA je metoda obarjanja TRIzol (uporabljeni reagenti vključujejo gvanidin izotiocianat, fenol, kloroform itd.), ki sta jo izumila dedek po imenu Piotr Chomczynski in babica Nicoletta Sacchi, ker ta izum omogoča hitro in enostavno ekstrakcijo RNA, od takrat se je začel vzpon raziskav RNA.

Kasneje je dedek ta patent prodal Invitrogenu in Invitrogen je to metodo promoviral v svetu in postala široko uporabljana metoda.

Kasneje je Invitrogen prevzel Thermo!

Reprezentativni izdelek: reagent TRIzol podjetja Invitrogen

Vendar metoda obarjanja TRIzol zahteva večkratno obarjanje in ekstrakcijo RNK, uporabljeni reagenti pa so strupeni in trajajo dolgo časa.

Zato se je pojavila druga generacija kolonsko-encimske metode čiščenja z uporabo silikagelne membrane kot specifičnega materiala za adsorpcijo nukleinske kisline, da se čim bolj poveča obnovitev RNA v vzorcu, medtem ko se odstranijo druge nečistoče.

Metoda druge generacije poenostavi delovanje na podlagi stabilnega delovanja, zmanjša faktor tveganja in izboljša učinkovitost ekstrakcije RNA.

Reprezentativni izdelki: QIAGEN RNeasy in večina domačih izdelkov

Vendar pa tako metoda prve kot druge generacije zahtevata uporabo DNaze za odstranitev kontaminacije DNA, kar prinaša nekaj neprijetnosti za nadaljnje poskuse.Preostala DNaza bo zmanjšala učinkovitost reverzne transkripcije in zmanjšala sintezo prve verige cDNA, kar bo vplivalo na točnost rezultatov.

Zato je metoda ekstrakcije tretje generacije optimizirana na podlagi druge generacije.Eksperimentu ni treba dodajati nobenih encimov, RNA pa je mogoče enostavno dobiti le z dvema stolpcema.

Stolpec 1: Stolpec za čiščenje DNK za čiščenje DNK

Stolpec 2: Stolpec samo za RNA specifično adsorbira in obnavlja RNA

Tako preprosta operacija ne le prihrani čas, ampak tudi olajša delovanje nadaljnjih poskusov!

Reprezentativni izdelki: QIAGEN RNeasy Plus inForegeneSerija izdelkov za čiščenje RNA

（RNeasy Plus）

（Foregene'sKomplet za izolacijo celotne rastlinske RNK）

Tiho ti povem!Foregene's RNA kit predstavlja tudi super enostaven za uporabo RNase Eraser, ki lahko popolnoma odstrani 400 μg RNase na trdni površini v 1 minuti, brez dodajanja strupenih snovi v človeško telo!

slika1: Primerjalna tabela operativnih procesov

Izdelki Foregene lahko dokončajo ekstrakcijo RNK v samo dveh pesmih, ne vzbudite drugih ljubosumnih na napredek vašega eksperimenta!

slika2:Eeksperimentalne rezultate primerjalna tabela

Prva generacija (1: TRIzol)

Druga generacija (2: RNeasy od QIAGEN)

Tretja generacija (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

slika3: graf qPCR (graf krivulje pomnoževanja)

Prva generacija (zelena pomeni TRIzol -, rdeča pomeni TRIzol +)

Druga generacija (nebesno modra pomeni QIAGEN RNeasy-, rdeča pomeni QIAGEN RNeasy +)

Tretja generacija (modra pomeni QIAGEN RNeasy plus, zelena pomeni Foregene)

(Opomba: graf qPCR »-« pomeni, da DNaza ni bila dodana in kontaminacija DNK ni bila odstranjena. Zato je CT višji in rezultat ni natančen; »+« pomeni, da je bila DNaza dodana in je bila kontaminacija DNK odstranjena, rezultat je točen)

Vsaka tehnična nadgradnja pomeni, da se delovanje eksperimenta razvija v enostavnejšo in uporabniku prijaznejšo smer.

Foregene želi pomagati več znanstvenim raziskovalcem prihraniti čas in stroške eksperimentov, pridobiti visokokakovostne eksperimentalne rezultate in skupaj ustvariti dragocenejše dosežke znanstvenih raziskav.