Naslednja analiza možnih težav vBukalnobris/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Čistilni stolpec je zamašen

V tem kompletu se pri operaciji ekstrakcije genomske DNK čistilna kolona neposredno adsorbira na vzorčni mešanici encimske lize brez koraka centrifugiranja, čistilna kolona pa je lahko blokirana zaradi nepopolne encimizacije in visoke viskoznosti vzorca.

Naslednji možni vzroki so naslednji:

1. Nepopolna encimska razgradnja vzorcev tkiv.

Priporočilo: Čas obdelave vzorca Foregene Protease je mogoče ustrezno podaljšati ali pa supernatant vzeti po centrifugiranju pri 12.000 obratih na minuto (~13.400× g) 5 minut.

2. Prekomerna uporaba vzorcev tkiv ali velikih tkiv.

Priporočilo: Najbolje je, da ne presežete 1Bukalno bris v vzorcu;če je vzorec prevelik, ustrezno povečajte odmerek pufra ST1, Foregene Protease, pufra ST2.

3. Viskoznost vzorca je previsoka.

Priporočilo: Vzorce lahko pred ekstrakcijo genomske DNA ustrezno razredčimo z 10 mM Tris-HCl.

4. Fragmenti krvne kartice so bili posesani.

Priporočilo: Prehodni čas centrifugiranja v 6. koraku genomske ekstrakcije krvnih madežev (kartica FTA) je mogoče ustrezno podaljšati.

Nizek izkoristek ali brez DNK

Pogosto obstajajo številni dejavniki, ki vplivajo na izkoristek genomske DNK, vključno z izvorom vzorca, pogoji shranjevanja vzorca, pripravo vzorca, manipulacijo itd.

Med ekstrakcijo ni mogoče pridobiti genomske DNK

Možni vzroki so naslednji:

1. Nepravilno konzerviranje vzorcev ali predolgo shranjevanje vodi do razgradnje genomske DNK.

Priporočilo: Brisi ust naj bodo po možnosti sveže vzorčeni, konzerviranih brisov pa ni priporočljivo uporabljati za operacije ekstrakcije genomske DNA;vzorci madežev krvi morajo zagotoviti ustrezno kakovost in čas shranjevanja ne sme biti predolg.

2. Premajhna uporaba tkiva lahko povzroči, da ne pride do ekstrakcije ustrezne genomske DNK.

Priporočilo: Sleditebuccal odvzemite navodila za vzorčenje brisa v vodniku za uporabo in obrišite čim večkrat, da se lahko na peroralni bris pritrdi dovolj celic za ekstrakcijo genomske DNK;za ekstrakcijo vzorca madežev krvi se lahko območje reza krvnih madežev ustrezno poveča.

3. Foregene Protease je nepravilno konzervirana, kar povzroči zmanjšanje njene aktivnosti ali inaktivacijo.

Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanjaForegene Protease ali jo zamenjajte z novo Foregene Protease za encimsko reakcijo.

4. Nepravilno shranjevanje kompleta ali čas shranjevanja je predolg, kar povzroči okvaro nekaterih komponent v kompletu.

Priporočilo: Kupite novegaBukalno bris DNKizolacija komplet za sorodne postopke.

5. Pufer WB ne dodaja absolutnega etanola.

Priporočilo: Potrdite, da pufer WB doda pravilno količino absolutnega etanola.

6. Eluent ni pravilno dodan silikonski foliji.

Priporočilo: Dodajte 65°Cpredhodno segret eluent pade na sredino silikonske membrane in pusti pri sobni temperaturi 5 minut, da se poveča učinkovitost eluiranja.

Low-yield genomska DNA izolirana

Naslednji možni vzroki so naslednji:

1. Nepravilno konzerviranje vzorcev ali predolgo shranjevanje vodi do razgradnje genomske DNK.

Priporočilo: Zaželeno je, da so peroralni brisi sveže vzorčeni, konzerviranih brisov pa se ne sme uporabljati za ekstrakcijo genomske DNK.

2. Če je količina vzorca tkiva premajhna, bo vsebnost ekstrahirane genomske DNK manjša.

Priporočilo: Sledite navodilom za vzorčenje ustnega brisa v navodilih za uporabo in brišite čim večkrat, da se lahko na ustni bris pritrdi dovolj celic za ekstrakcijo genomske DNK.

3. Foregene Protease je nepravilno konzervirana, kar povzroči zmanjšanje njene aktivnosti ali inaktivacijo.

Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanjathe Foregensko proteazo ali jo zamenjajte z novo Foregene proteaza za encimsko reakcijo.

4. Težave z eluentom.

Priporočilo: Za elucijo uporabite pufer EB;če uporabljaš ddH₂O ali drugih eluentov, potrdite, da je pH eluata med 7,0–8,5.

5. Eluat ni pravilno dodan po kapljicah.

Priporočilo: dodajte kapljice eluenta na sredino silikonske membrane in pustite pri sobni temperaturi 5 minut, da povečate učinkovitost eluiranja.

6. Elucijska tekočina se nabira premalo.

Priporočilo: Uporabite eluent za elucijo genomske DNK, kot je zahtevano v navodilih, vsajnič majn kot 15μl.

Low čistost of genomska DNKizolirana

Nizka čistost genomske DNK lahko privede do neuspeha ali nezadovoljivih rezultatov nadaljnjih poskusov, kot so: encimov ni mogoče razrezati, PCR ne more dobiti genskega fragmenta, ki nas zanima, itd.

Možni vzroki so naslednji:

1. Heteroproteinsko onesnaženje, RNK onesnaženje.

Analiza: Čistilna kolona ni bila oprana s pufrom PW;kolona za čiščenje s spiranjem pufra PW ni bila sprana s pravilno centrifugalno hitrostjo.

Priporočilo: Pred dodajanjem etanola se prepričajte, da v supernatantu ni oborine;očistite kolono za čiščenje v skladu z navodili in tega koraka ne smete izpustiti.

2. Onesnaženje z nečistimi ioni.

Analiza: kolona za čiščenje s spiranjem pufra WB je bila izpuščena ali sprana samo enkrat, kar je povzročilo preostalo ionsko kontaminacijo.

Priporočilo: Buffer WB 2-krat sperite po navodilih, da čim bolj odstranite ostanke ionov.

3. Kontaminacija encimov RNA.

Analiza: v pufer smo dodali tuje RNaze;Postopek izpiranja pufra PW je bil nepravilen, kar je povzročilo ostanke RNaze, kar je vplivalo na poskusne operacije RNA v smeri toka, kot je transkripcija in vitro.

Priporočilo: nukleinska kislina serije Foregeneizolakiti lahko odstranijo RNK brez dodatnega dodajanja RNaze,torej Komplet za izolacijo DNK bukalnih brisov/kartic FTAneedn't dodajte RNazo;ne pozabite slediti navodilom za pralno čistilno kolono Buffer PW in tega koraka ne smete izpustiti.

4. Ostanek etanola.

Analiza: Pufer WB ni izvedel centrifugiranja praznih epruvet po izpiranju čistilne kolone.

Priporočilo: Izvedite pravilno centrifugiranje prazne epruvete v skladu z navodili.

5. Ostalo onesnaženje z nečistočami.

Analiza: Shranjeni ali posebni vzorci niso predhodno obdelani.

Priporočilo: Vzorec temeljito predhodno obdelajte po navodilih.