Rojstvo PCR
PCR（verižna reakcija s polimerazo）
Od izuma verižne reakcije s polimerazo je minilo več kot 30 let.Tehnologija PCR je že več kot 30 let, potem ko številni znanstveniki po vsem svetu še naprej dopolnjujejo in izboljšujejo, postala najbolj razširjena in pogosto uporabljena ter najpomembnejša osnovna raziskovalna metoda na celotnem področju Life Sciences.
TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR itd., razviti na podlagi široke uporabe tradicionalne PCR tehnologije, kot tudi na novo nastali Digital PCR (digitalni PCR), so močno obogatili raziskovalne metode večine znanstvenih raziskovalcev in močno pospešili razvojni proces sodobnih znanosti o življenju, zlasti molekularne biologije, ki je veliko prispevala k preučevanju življenja in narave človeštva kot celote.
Napake tradicionalne tehnologije PCR
Ločevanje kompleksnih nukleinskih kislin inekstrakcija:
★ Tradicionalna tehnologija PCR: zahtevana
★ Tehnologija, pridobljena s PCR: zahtevana
★ Vzorci DNK in RNK: velike razlike, zahtevne zahteve za delovanje
★ Nevarnosti za telo: strupeni reagenti škodujejo telesu
Tradicionalna tehnologija PCR in tehnologija derivatov imata predpogoj – ločevanje in čiščenje nukleinske kisline
Vsak biološki vzorec mora iti skozi vrsto zapletenih in dolgočasnih obdelav vzorcev, da dobimo vzorce nukleinske kisline, ki izpolnjujejo zahteve tehnologije PCR.
Ločevanje in ekstrakcija DNK in RNK je bila vedno osnovna naloga, ki jo morajo ustrezni znanstveni raziskovalci ponavljati vsak dan.
Zaradi velikih razlik med vzorci se zelo razlikujejo tudi postopki ločevanja in ekstrakcije DNK in RNK.To delo zahteva visoko stopnjo tehnične usposobljenosti operaterjev.Tradicionalne tehnike ločevanja in ekstrakcije zahtevajo dolgotrajen stik z nekaterimi zelo strupenimi kemičnimi reagenti.To bo povzročilo nepopravljivo škodo na telesu operaterja in celo povzročilo neposredno škodo med poskusom.
Hkrati je za tiste, ki imajo veliko število vzorcev za preučevanje, ločevanje in ekstrakcija nukleinskih kislin delovno intenzivna naloga.
Kompleti za izolacijo in ekstrakcijo nukleinske kisline na trgu so zdaj zreli in obstaja veliko blagovnih znamk, vendar so približno enake.Ne glede na to, ali gre za centrifugalni komplet za kolono s silikagelno membrano ali komplet za metodo magnetnih kroglic, traja veliko časa in je drago.Poleg stroškov kompleta obstajajo tudi posebne zahteve za laboratorijsko opremo.Avtomatizirana delovna postaja, ki se uporablja pri metodi z magnetnimi kroglicami, je zelo tipična obsežna oprema visoke vrednosti, kar je velik strošek za laboratorij.
V povzetku
Pred izvedbo poskusov PCR je predobdelava vzorcev neizogiben in vedno glavobol za raziskovalce.Kako rešiti ta problem in ali je PCR poskuse mogoče izvesti brez ločevanja in ekstrakcije nukleinskih kislin, je vedno razmišljala večina znanstvenih raziskovalcev in osebja kliničnih laboratorijev.
Rešitev Foregene
Po letih mukotrpnega raziskovanja tehnologije Direct PCR in povezanih kompletov je Forgene uspešno prebil mnoga ozka grla in uspešno dosegel neposredni PCR za številne vrste različnih vzorcev z močno odpornostjo in prilagodljivostjo, kar je raziskovalcem omogočilo, da se znebijo okornega in nevarnega ločevanja in ekstrakcije nukleinskih kislin.To bo močno zmanjšalo delovno intenzivnost vseh, pospešilo poskusni proces in prihranilo stroške znanstvenih raziskav in testiranja.
Forgeneovo razumevanje in poznavanje DirectPCR
Prvič, tehnologija DirectPCR je neposredna tehnologija PCR za različna biološka vzorčna tkiva.Pod tem tehničnim pogojem ni treba ločevati in ekstrahirati nukleinskih kislin, vzorec tkiva pa se neposredno uporabi kot predmet, za reakcijo PCR pa se dodajo primerji ciljnega gena.
Drugič, tehnologija DirectPCR ni samo tradicionalna tehnologija pomnoževanja šablone DNK, ampak vključuje tudi PCR s povratno transkripcijo šablone RNA.
Tretjič, tehnologija DirectPCR ne samo neposredno izvaja rutinske kvalitativne reakcije PCR na vzorcih tkiv, ampak vključuje tudi reakcije qPCR v realnem času, ki zahtevajo, da ima reakcijski sistem močno sposobnost, da se upre motnjam fluorescence v ozadju in antagonizira endogene dušilce fluorescence.
Četrtič, vzorci tkiva, na katere cilja tehnologija DirectPCR, zahtevajo le sprostitev predlog nukleinskih kislin in ne odstranijo beljakovin, polisaharidov, ionov soli itd., ki motijo reakcijo PCR.To zahteva, da imata polimeraza nukleinske kisline in mešanica PCR v reakcijskem sistemu odlično protireverzibilnost in prilagodljivost ter lahko zagotovita encimsko aktivnost in natančnost replikacije v kompleksnih pogojih.
Petič, vzorci tkiva, na katere cilja tehnologija DirectPCR, niso bili izpostavljeni nobeni obdelavi obogatitve z nukleinsko kislino, količina predloge pa je zelo majhna, kar zahteva izjemno visoko občutljivost in učinkovitost pomnoževanja reakcijskega sistema.
Zaključek
Tehnologija DirectPCR je eden najpomembnejših tehnoloških dosežkov in inovacij v zadnjih 30 letih od rojstva tehnologije PCR.Forgene je bil in bo še naprej pionir in inovator te tehnologije.
Možnost uporabe tehnologije DirectPCR je zelo široka.Nenehno izboljševanje in spodbujanje te tehnologije bo zagotovo prineslo subverzivne spremembe v znanstvenoraziskovalno in inšpekcijsko delo.To je revolucija tehnologije PCR.
Čas objave: 21. februarja 2017
