1：Pravočasno zamenjajte eksperimentalne zaloge

Nastavite (NTC) negativno kontrolo in jo večkrat ponovite.Ko se ugotovi, da je v laboratoriju kontaminacija s PCR produktom, pravočasno zamenjajte vse zaloge za eksperimente.Kot na primer: ponovno razredčite in pripravite primerje, ponovno sterilizirajte konico pipete, EP epruveto, ddH2O itd., zamenjajte z novo pipeto in si začasno izposodite druge laboratorije za izvajanje poskusov PCR.Kontaminiran laboratorij je treba prezračevati in obsevati z ultravijoličnimi žarki, dokler kontaminacija s produktom PCR ni odstranjena, preden nadaljujete s poskusom.

2：Podaljšajte čas izpostavljenosti UV žarkom

Omeniti velja, da je treba za odstranitev kontaminacije DNK redno ultravijolično obsevanje podaljšati za 2 uri kot običajno.Kljub temu učinek UV-sevanja na odstranjevanje majhnih fragmentov (pod 200 bp) kontaminacije DNK še vedno ni dober.

Ultravijolična valovna dolžina (nm) je običajno 254/300 nm in zadostuje za 30 minutno obsevanje.Upoštevati je treba, da je treba pri izbiri UV za odpravo kontaminacije preostalih produktov PCR upoštevati dolžino produkta PCR in porazdelitev baz v zaporedju produkta.UV obsevanje je učinkovito samo za dolge fragmente nad 500 bp in ima majhen učinek na kratke fragmente.

Med UV obsevanjem bodo pirimidinske baze v produktu PCR tvorile dimere.Ti dimeri lahko prekinejo podaljšek, vendar ne morejo vsi pirimidini v verigi DNA tvoriti dimerjev, UV-obsevanje pa lahko tudi zlomi dimerje..Stopnja tvorbe dimerja je odvisna od valovne dolžine UV, vrste pirimidinskega dimera in zaporedja nukleotidov, ki mejijo na mesto dimera.Če so fragmenti, pomnoženi s PCR, majhni, je torej priporočljiva uporaba sistema za kontaminacijo produkta UNG proti PCR.

3：Pogosto uporabljeni lovilci onesnaženja DNK

Ob dodajanju pipet zlahka nastanejo aerosoli, ki se jim je težko izogniti in se hitro usedejo.Zato je nedvomno dobra izbira pogosta uporaba posebnih lovilcev onesnaženja DNK za preprečevanje širjenja onesnaženja DNK.

4：Uporabite sistem proti onesnaževanju UNG

Ko je kontaminacija z izdelkom PCR odstranjena, lahko preskusni laboratorij uporabi sistem za kontaminacijo z izdelkom UNG proti PCR, da prepreči kontaminacijo s produktom PCR.V splošnih laboratorijih lahko izvedete preproste eksperimentalne razdelitve, strogo ločite območje z izdelkom PCR od drugih območij, določite določena laboratorijska pravila in predpise ter izvedete ustrezno usposabljanje za preprečevanje pojava kontaminacije z izdelkom PCR.

Priporočila: Vzpostavitev primernega laboratorija za PCR, vzdrževanje dobrega okolja za PCR, oblikovanje standardnih operativnih postopkov PCR in negovanje stroge ozaveščenosti izvajalcev poskusov o delovanju so ključnega pomena za preprečevanje ali zmanjševanje onesnaževanja s poskusi PCR.