Vzpostavite SOP za poskus PCR, da standardizirate vedenje osebja, ki izvaja poskus.
Eksperimentator se dosledno drži operativnih postopkov in minimizira PCR onesnaženje, ki bi ga lahko povzročil človeški dejavnik, oziroma preprečuje nastanek onesnaženja.Poleg tega mora izvajalec eksperimenta imeti ustrezna strokovna znanja in veščine, vključno z veščino upravljanja sorodne opreme, razjasnitvijo celotnega delovnega procesa, obvladovanjem metod čiščenja kontaminacije in laboratorijskih metod nadzora kakovosti ter sposobnostjo pravilne interpretacije rezultatov testa.
Vzpostavite standardni laboratorij za PCR.
Laboratorij za PCR je načeloma razdeljen na štiri področja, in sicer na območje priprave reagenta, območje obdelave vzorcev, območje pomnoževanja in območje analize produkta pomnoževanja.Prvi dve območji sta območji pred ojačanjem, zadnji dve področji pa sta območji po ojačanju.Območje pred ojačanjem in območje po ojačanju morata biti strogo ločeni.Eksperimentalni materiali, reagenti, snemalni papir, pisala, čistilni materiali itd. lahko tečejo le iz območja pred pomnoževanjem v območje po pomnoževanju, to je iz območja priprave reagenta → območja obdelave vzorca → območja pomnoževanja → območja analize produkta pomnoževanja, in ne smejo teči nazaj.Zračni tok v laboratoriju mora prav tako teči od območja pred ojačanjem do območja po ojačanju in ne nazaj.Idealna zasnova laboratorija PCR je prikazana spodaj:
Slika A: Idealen način laboratorijske postavitve PCR z negativnim tlakom v pufrski sobi
Slika B: Idealen način laboratorijske postavitve PCR s pozitivnim tlakom v puferskem prostoru
Diagrami laboratorijskih nastavitev PCR, prikazani na sliki A in sliki B, bi morali biti bolj idealen način nastavitve in laboratorij s pogoji se lahko pri načrtovanju sklicuje na ta način.Za običajne laboratorije je priporočljivo, da sta območje pomnoževanja PCR in območje analize izdelka ločena, odprtina pokrova pa naj bo čim manjša v območju za pripravo vzorca in območju pomnoževanja PCR.Ne pozabite: Izdelke in eksperimentalne zaloge v območju za analizo izdelkov je strogo prepovedano prenašati v območje za pripravo vzorcev in območje za pomnoževanje PCR.
Če laboratorij izvaja le PCR detekcijo in identifikacijo, je priporočljivo uporabiti fluorescentno kvantitativno PCR namesto običajne PCR.
Rezultate kvantitativne detekcije fluorescence PCR je mogoče zbrati in analizirati s fluorescenčnimi signali, tako da po reakciji ni treba odpreti pokrova za elektroforezo, s čimer se izognemo kontaminaciji produkta PCR, ki jo povzroči uhajanje reakcijskih produktov, da nastanejo aerosoli.Če med korakom nalaganja gelske elektroforeze povečate število odprtin pokrovčkov, bo verjetno prišlo do kontaminacije z aerosolom.Priporoča se spodbujanje uporabe kvantitativne PCR in postopna zamenjava kvalitativne PCR.
Za reakcijo PCR se uporablja UNG anti-PCR kontaminacijski sistem.
Sistem uporablja dUTP namesto dTTP.Po reakciji PCR so vsi produkti PCR (fragmenti DNA) vključeni z dUTP;v naslednjem krogu reakcije PCR se sistemu dodan encim UNG inkubira pri 37°C 5 minut pred PCR, ki lahko specifično razgradi vse fragmente DNA, ki vsebujejo dUTP, in nato izvede reakcijo PCR.To lahko popolnoma odstrani aerosolno kontaminacijo, ki jo povzročajo produkti PCR.Učinek je prikazan na spodnji sliki:
Opomba: Za neposredno serijo PCR lahko izberete serijo izdelkov sistema proti kontaminaciji izdelkov PCR ForegenePredlagaj
Za laboratorije, ki izvajajo obsežno genotipsko testiranje, je močno priporočljivo, da poleg izgradnje primernih laboratorijev za testiranje reagentov uporabljajo sistem za kontaminacijo izdelkov UNG proti PCR.
Opomnik: uporaba tega sistema ne more odstraniti že povzročene kontaminacije produkta PCR.Zato je treba sistem UNG uporabiti na začetku ustreznega testa, sistem UNG pa je treba uporabiti za pomnoževanje PCR, da se prepreči kontaminacija produktov PCR Lažno pozitivno.
Pri izvajanju obsežnih testiranj, kot so:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Komplet za direktno PCR semena rastlin-UNG；
Kit za neposredno PCR živalskega tkiva-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ta serija kompletov iz Foregenene samo, da lahko hitro in v velikem obsegu izvaja detekcijo PCR, temveč tudi učinkovito preprečuje in nadzoruje kontaminacijo izdelkov PCR.
Čas objave: 19. marec 2021
