Izgradnja sistema SOP

Vzpostavite SOP za poskus PCR, da standardizirate vedenje osebja, ki izvaja poskus.

Eksperimentatorji se dosledno držijo operativnih postopkov in minimizirajo PCR onesnaženje, ki ga lahko povzroči človeški dejavnik, ali preprečijo pojav onesnaženja med delovanjem.Poleg tega mora izvajalec eksperimenta imeti ustrezna strokovna znanja in veščine, vključno z veščino upravljanja sorodne opreme, razjasnitvijo celotnega delovnega procesa, obvladovanjem metod čiščenja kontaminacije in laboratorijskih metod nadzora kakovosti ter sposobnostjo pravilne interpretacije rezultatov testa.

Gradnja standardnega laboratorija za PCR

Laboratorij za PCR je načeloma razdeljen na štiri področja, in sicer na območje priprave reagenta, območje obdelave vzorcev, območje pomnoževanja in območje analize produkta pomnoževanja.Prvi dve območji sta območji pred ojačanjem, zadnji dve področji pa sta območji po ojačanju.Območje pred ojačanjem in območje po ojačanju morata biti strogo ločeni.Eksperimentalni materiali, reagenti, snemalni papir, pisala, čistilni materiali itd. lahko tečejo le iz območja pred pomnoževanjem v območje po pomnoževanju, to je iz območja priprave reagenta, območja obdelave vzorca, območja pomnoževanja in območja analize produkta pomnoževanja, in ne smejo teči v obratni smeri.Zračni tok v laboratoriju mora prav tako teči iz območja pred ojačanjem v območje po ojačanju, ne pa v obratni smeri.

Zmanjšajte poskusne korake

Če laboratorij izvaja le PCR detekcijo in identifikacijo, je priporočljivo uporabiti fluorescentno kvantitativno PCR namesto običajne PCR.

Rezultate kvantitativne detekcije fluorescence PCR je mogoče zbrati in analizirati s fluorescenčnimi signali, tako da po reakciji ni treba odpreti pokrova za elektroforezo, s čimer se izognemo kontaminaciji produktov PCR, ki jo povzroči uhajanje reakcijskih produktov, da nastanejo aerosoli.Če med korakom nalaganja gelske elektroforeze povečate število odprtin pokrovčkov, bo verjetno prišlo do kontaminacije z aerosolom.Priporoča se spodbujanje uporabe kvantitativne PCR in postopna zamenjava kvalitativne PCR.

Sprejmite UNG sistem proti onesnaževanju

Za reakcijo PCR se uporablja UNG anti-PCR kontaminacijski sistem.

Sistem uporablja dUTP namesto dTTP.Po reakciji PCR so vsi produkti PCR (fragmenti DNA) vključeni z dUTP;v naslednjem krogu reakcije PCR se encim UNG, dodan v sistem, inkubira pri 37 °C 5 minut pred PCR, ki je lahko specifičen Razgradite vse fragmente DNA, ki vsebujejo dUTP, in nato izvedite reakcijo PCR.To lahko popolnoma odstrani aerosolno kontaminacijo, ki jo povzročajo produkti PCR.Učinek je prikazan na spodnji sliki:

Opomba: Za neposredno serijo PCR lahko izberete serijo izdelkov sistema proti onesnaževanju izdelkov PCR podjetja FJ Biotech.

Predlagaj

Za laboratorije, ki izvajajo obsežno genotipsko testiranje, je močno priporočljivo, da poleg izgradnje primernih laboratorijev za testiranje reagentov uporabljajo sistem za kontaminacijo izdelkov UNG proti PCR.

Opomnik: uporaba tega sistema ne more odstraniti že povzročene kontaminacije produkta PCR.Zato je treba sistem UNG uporabiti na začetku ustreznega testa, sistem UNG pa je treba vedno uporabljati za pomnoževanje PCR, da se prepreči kontaminacija produktov PCR.Lažno pozitiven.

Pri izvajanju obsežnih testiranj je priporočljiva uporaba sistema Direct PCR-UNG podjetja Forge Biotech, kot je: Komplet za neposredno PCR rastlinskih listov-UNG；

Komplet za direktno PCR semena rastlin-UNG；

Kit za neposredno PCR živalskega tkiva-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Ta serija kompletov podjetja Foregene ne more samo izvajati detekcije PCR hitro in v velikem obsegu, temveč tudi učinkovito preprečiti in nadzorovati kontaminacijo izdelkov PCR.