Svinec

Dolga nekodirajoča RNA, lncRNA je nekodirajoča RNA z dolžino večjo od 200 nukleotidov, na splošno med 200-100000 nt.lncRNA uravnava izražanje genov na epigenetski, transkripcijski in post-transkripcijski ravni ter sodeluje pri utišanju kromosoma X, vtiskovanju genoma in modifikaciji kromatina, aktivaciji transkripcije, motnjah transkripcije, jedrskem transportu, regulaciji celičnega cikla, regulaciji celične diferenciacije in učinkih kompenzacije odmerka (učinek kompenzacije odmerka) ter številni drugi pomembni regulacijski procesi so tesno povezani s pojavom, razvojem in preprečevanjem človeškega bolezni in so trenutno ena izmed vročih točk na področju biomedicine.

01  Vrste in značilnosti LncRNA

lncRNA je razdeljena na veliko tipov glede na različne vire njene tvorbe, kot je prikazano na zgornji sliki.Ima naslednje značilnosti:

1. lncRNA so običajno daljše, z dinamično ekspresijo in različnimi metodami spajanja med diferenciacijo
2. V primerjavi s kodirnimi geni ima lncRNA običajno nižjo stopnjo izražanja
3. Večina lncRNA ima očitno specifičnost časovnega in prostorskega izražanja v procesu diferenciacije in razvoja tkiv
4. Pri tumorjih in drugih boleznih so značilni izrazi
5. Podcelične lokacije lncRNA so raznolike
6. Zaporedje je nizko ohranjeno, vendar ima funkcija določeno stopnjo ohranjenosti itd.

02 Pogosto zastavljena vprašanja o reverzni transkripciji LncRNA

Zaradi nizke vsebnosti lncRNA v celicah, dolge dolžine in strukture na visoki ravni ima takšna RNA pogosto zapletene strukture, kot so stebelne zanke ali lasnice, in RT-qPCR je nagnjen k težavam neuspešne reverzne transkripcije ali nizke učinkovitosti.

03 Rešitev reverzne transkripcije LncRNA

V osrednjem pravilu se proces virusov RNA, ki uporabljajo lastno reverzno transkriptazo za sintezo DNA z uporabo RNA kot predloge, imenuje reverzna transkripcija.Postopek uporabe reverzne transkriptaze virusa RNA za sintezo predloge cDNA in vitro se imenuje reverzna transkripcija.Glavni elementi, vključeni v sistem reverzne transkripcije: predloga RNA, reverzna transkriptaza, primerji in druge komponente.

1. Predloga RNA

Vpliv RNA predloge na reverzno transkripcijo se kaže v njeni strukturi, čistosti in celovitosti.Večja kot je čistost in celovitost ekstrahirane RNA, večja je učinkovitost reverzne transkripcije in natančnejši so kasnejši kvantitativni rezultati.RNA, prečiščena z običajno uporabljenimi reagenti za ekstrakcijo RNA, pogosto vsebuje ostanke alkohola in gvanidinskih soli, ki imajo močan zaviralni učinek na večino reverzne transkriptaze.

2.Reverzna transkriptaza

Reverzna transkriptaza ima ključen vpliv v celotnem sistemu reverzne transkripcije.Primerna temperatura za reverzno transkriptazo, ki se uporablja v večini laboratorijev, je običajno 42 °C.Pravzaprav odpiranje strukture RNK na visoki ravni zahteva višjo temperaturo, zato so zahteve za reverzno transkriptazo višje.

3.Primer

Primerji za reverzno prepisovanje vključujejo gensko specifične primerje, naključne primerje in Oligo dT primerje.Večina lncRNA ne vsebuje poliA repov in pomembno je pravilno ujemanje naključnih primerjev z Oligo dT.

4.Druge komponente

Glede na dejstvo, da je RNA še posebej lahko razgraditi, je mogoče minimizirati vnos komponent v sistem reverzne transkripcije, ki lahko učinkovito preprečijo vstop RNaze in zagotovijo nemoten potek reverzne transkripcije.

Foregenpridobi iz predloge RNA, reverzna transkripcija v qPCR

Izčrpno spremljajte svoje odkrivanje lncRNA

Skupna živalska RNA IsolationKomplet (s kolono za odstranitev gDNA)

Skupna celična RNA IsolationKomplet (s kolono za odstranitev gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (z gDNazo) (super predmešanica za sintezo prve verige cDNA iz lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aprednosti ofEkstrakcija RNA:

Komplet uporablja tehnologijo ekstrakcije RNK tretje generacije, uporaba DNaze ni potrebna.

11 minut iz gojenih celic na ploščah s 96, 24, 12 in 6 vdolbinicami, visoko učinkovita ekstrakcija celotne celične RNA brez gDNA, visoke čistosti in visoke kakovosti.

Prednosti reverzne transkripcije lncRNA:

Sistem reverzne transkripcije, posebej razvit za LncRNA za hitro odstranjevanje kontaminacije genomske DNK.

Sistem reverzne transkripcije ima visoko toplotno stabilnost in še vedno dobro deluje pri reverzni transkripciji pri 50 °C.

Predloge z visoko vsebnostjo GC in kompleksno sekundarno strukturo je mogoče obrniti z visoko učinkovitostjo.

Prednostiof qPCR:

Foregene Taq polimeraza z vročim zagonom ima višjo učinkovitost pomnoževanja, večjo občutljivost pomnoževanja in večjo specifičnost pomnoževanja

Zaradi optimizirane Real PCR Easy Mix ima SYBR Green I višjo občutljivost zaznavanja, njegova intenzivnost fluorescence pa je 3- do 5-krat večja od podobnih izdelkov, kar lahko zadovolji potrebe različnih vrst kvantitativnih poskusov fluorescence.