Uvod:

Molekule RNA lahko v veliki meri sodelujejo z drugimi biološkimi molekulami, kot so beljakovine, DNA in RNA, in tako obstajajo v celicah in organizmih v obliki makromolekularnih kompleksov.Med njimi so RNA-proteinski kompleksi obstoj in delovanje RNA Ena od pomembnih oblik.RNA pull-down je klasična metoda za presejanje in identifikacijo molekul RNA, zlasti medsebojno delujočih proteinov molekul lncRNA, in jo priznava večina raziskovalcev in mednarodnih avtoritativnih akademskih revij.Danes bo FORREGENE z vami delil eksperimentalni princip in tehnični postopek RNA pull-down, morda ga lahko uporabite

1. Eksperimentalni princip tehnologije RNA pull down:

In vitro transkripcija in sinteza z biotinom označene tarčne lncRNA ali fragmentov lncRNA (vključno z fragmenti RNA, ki se uporabljajo kot pozitivne in negativne kontrole), in inkubirati s celičnimi ekstrakti;uporabite z avidinom zasidrane magnetne kroglice za zbiranje kompleksov RNA-protein ali RNA-RNA. Po temeljitem izpiranju se kompleks eluira.Če zaznate proteinsko ciljno molekulo, ki interagira z lncRNA, izvedite proteinsko elektroforezo na produktu RNA-pull down, zaznajte ciljni protein z barvanjem s srebrom in odrežite gel za masno spektrometrijo;tudi neposredno izvaja Western blot verifikacijo na padajočem izdelku;če so odkrite Za ciljne molekule RNA, ki medsebojno delujejo z lncRNA, so produkti RNA-pull down izpostavljeni ekstrakciji RNA in izvedena je specifična detekcija qRT-PCR.

2. Eksperimentalni proces tehnologije RNA pull down:

3. Tehnična služba za odstranitev RNA FOREGENE:

Kultura celic

Priprava celičnega celičnega/jedrnega/plazemskega proteinskega ekstrakta

RNA pull down poskus

Elektroforeza SDS-PAGE, barvanje s srebrom

Masna spektrometrija in WB poskusi

Eksperimentalno poročilo

4. Eksperimentalni primer

Naslednja slika prikazuje rezultate FJ Bio-Bio RNA pull down in detekcije elektroforeze SDS-PAGE, pri čemer rdeča puščica označuje pas razlike:

Raziskovalna skupina profesorja Song Xuja z Univerze v Sečuanu je nabrala 15 let dolgoročnega kopičenja na področju raziskav lncRNA.Foregene Bio in raziskovalna skupina profesorja Song Xuja sta sodelovali pri lansiranju tehnologije RNA pull down lncRNA, ki vam bo dala zadovoljive rezultate za vaš poskus.