Laboratorijsko testiranje se začne z odvzemom vzorcev, odvzem vzorcev pa je najlažje spregledati.Najpomembnejša stvar pri zbiranju vzorcev je, da izberete pravilno vrsto vzorca, uporabite ustrezna orodja za vzorčenje in opravite razumen transport in obdelavo.

I. Vrsta vzorca

Pogoste vrste vzorcev so naslednje:

Metoda vzorčenja se lahko nanaša na tehnične specifikacije za okoljsko spremljanje novega koronavirusa na tržnici s kmetijsko trgovino (bazar)«:

1. Vzorci brisov z brisov grla, rok, oblačil in drugih predmetov izvajalcev: v epruveti za vzorčenje virusa je treba uporabiti raztopino za ohranjanje virusa in v celoti infiltrirati vatirane palčke za vzorčenje.Površino tal) večkrat nanesemo in splaknemo več kot 3-krat.Hkrati je potrebno izvesti večtočkovno porazdeljeno vzorčenje na površini vzorčenega objekta.

2. Vzorci brisov s površine živil: vzorcev živil ni mogoče odvzeti neposredno.Hrano, ki jo želite zbrati, morate pred zbiranjem vzorcev skrbno ločiti in shraniti v čisto vrečko za vzorce.Raztopino za ohranjanje virusa je treba uporabiti v epruveti za vzorčenje virusa, potem ko ste popolnoma namočili vatirano palčko za vzorčenje, da večkrat razmažete in izperete površino vzorca hrane, ki ga želite odvzeti, več kot 3-krat.Hkrati je potrebno izvesti večtočkovno porazdeljeno vzorčenje na površini vzorca.

3. Vzorci odplak: Glede na razporeditev drenažnega sistema na trgu izberite 2-3 lokacije vzorčenja odplak, pri čemer se osredotočite na zbiranje notranjega cevnega omrežja, dolvodno od smeri toka vode ali povezavo z občinskim cevnim omrežjem.Za odvzem vzorca brisa ga potopite v odplake z vatirano palčko za vzorčenje, da absorbira odplake, in ga več kot 3-krat sperite v epruveti za vzorčenje.Za zbiranje vzorcev odplak uporabite polietilenske plastične steklenice za zbiranje 30-500 ml vzorcev odplak;za zbiranje odplak s prostornino, večjo od 500 ml, se lahko uporabijo polietilenska plastična vedra ali posebna oprema za obogatitev vzorcev vode na kraju samem.Hkrati je potrebno izvesti večtočkovno porazdeljeno vzorčenje za mesto vzorčenja odplak.

4. Živalski vzorci: Pri živih živalih se lahko za zbiranje brisov s površine telesa, orofaringealnih brisov in analnih brisov uporabijo brisi za vzorčenje, odvzamejo pa se lahko tudi vzorci iztrebkov ali izločkov in jih ustrezno zabeležijo na tahografski list.Pri živalskih vzorcih, ki so bili odrti itd., z vatiranimi palčkami odvzemite njihove telesne površine in vzorce brisov telesnih votlin.Raztopino za ohranjanje virusa je treba uporabiti v epruveti za vzorčenje virusa, da se popolnoma infiltrira v vatirano palčko za vzorčenje, nato pa ponovite nanašanje na površino vzorca hrane, ki ga želite odvzeti.Shabu več kot 3-krat.Hkrati je potrebno izvesti večtočkovno porazdeljeno vzorčenje na površini vzorca.

5. Druge naprave: posode za prevoz in vzrejo živali, kot so kletke ali akvarije.Najprej opazujte ali razumejte posebne vrste živali, shranjenih in vzrejenih v posodi, in vzemite vzorce brisov na notranji steni posode ali tekoče vzorce vsebine.

6. Zbirajte vzorce aerosolov na območjih, kjer se zbirajo ljudje, slabo prezračevanih lokalnih trgovskih prostorih, pisarnah in toaletnih prostorih.

II.Orodja za vzorčenje
1. Epruveta za odvzem krvi
Če morate pozneje opraviti testiranje nukleinske kisline in antikoagulantne vzorce, je priporočljivo, da za zbiranje krvi uporabite vakuumsko krvno žilo, ki vsebuje antikoagulant EDTA;za vzorce seruma je priporočljivo uporabiti vakuumsko krvno žilo brez antikoagulanta.

2. Bris za vzorčenje

Namesto blazinic iz kalcijevega alginata ali tamponov z lesenimi drogovi je priporočljiva uporaba polipropilenskih tamponov, ker lahko vsebujejo snovi, ki inaktivirajo nekatere viruse in zavirajo PCR testiranje.Paličic z vatirano palčko ni mogoče uporabiti, ker bombažna vlakna močno absorbirajo beljakovine in jih je težko eluirati v kasnejšo raztopino za konzerviranje.

V »Tehničnih specifikacijah za mešano zbiranje 10 v 1 in odkrivanje novih nukleinskih kislin koronavirusa« je jasno določeno, da »mora biti bris za vzorčenje izdelan iz poliestra, najlona in drugih materialov, ki niso bombaž in kalcijev alginat, ročaj pa mora biti izdelan iz materiala, ki ni lesen.Točka preloma je približno 3 cm od vrha glave brisa, ki jo je enostavno zlomiti.«

CDC v Združenih državah je prav tako omenil: »Uporabljajte samo tampone iz sintetičnih vlaken s plastičnimi ali žičnimi tulci.Ne uporabljajte tamponov s kalcijevim alginatom ali tamponov z lesenimi tulci,saj lahko vsebujejo snovi, ki inaktivirajo nekatere viruse in zavirajo PCR testiranje.

Trenutno se široko uporablja sterilna najlonska palčka za kosmičenje za enkratno uporabo v kombinaciji s plastično palico.Kosmičasti tampon ima boljšo absorpcijo vode in hitrost sproščanja.Glede na različna mesta vzorčenja ima glava brisa tudi različne velikosti in vlakna.Debelina.”

3. Vzorec raztopine za ohranjanje transporta

Raztopina za ohranjanje inaktivacije virusa: ustrezna količina koncentracije gvanidinske soli in različne komponente za lizo virusa lahko neposredno lizirajo virus, da sprostijo nukleinsko kislino, inaktivirajo RNazo in DNazo ter zagotovijo celovitost nukleinske kisline, ki se lahko uporabi za kasnejšo detekcijo qPCR.Ni ga mogoče uporabiti za gojenje in izolacijo virusa.

Raztopina za transport in konzerviranje virusa: vsebuje soli, aminokisline, vitamine, glukozo in beljakovine, potrebne za preživetje virusa, ki lahko vzdržuje aktivnost virusa.Uporablja se lahko za ekstrakcijo nukleinske kisline in odkrivanje virusa v prihodnosti, prav tako pa se lahko uporablja za gojenje in ločevanje virusa.

4. Epruveta za shranjevanje vzorcev in vrečka za vzorce

Epruveta za shranjevanje vzorcev mora biti sterilna plastična epruveta z navojnim pokrovčkom, ki ne absorbira nukleinske kisline.Vsako epruveto za vzorec je treba prekriti z vrečko za vzorec, da preprečite puščanje in kontaminacijo vzorca.

III.Moteče snovi v vzorcu

Moteče snovi v poskusih PCR

1. endogeni moteči

Snovi, prisotne v vzorcu telesa, lahko motijo ​​odkrivanje drugih snovi.

Kri:hem (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), trigliceridi, IgG itd.;

urin:Urea (20 mM);

Blato:rastlinski polisaharidi, holat;

Tkivo:proteaza, kolagen;

Mleko: proteaza, kalcijev ion;

Droge: antibiotiki, protivirusna zdravila, hormoni itd.

drugo.

2. eksogeni moteči

Prihaja iz snovi, ki lahko motijo ​​odkrivanje drugih snovi in ​​vitro.Dodatki vzorcu in snovi, s katerimi lahko pridemo v stik med zbiranjem in obdelavo vzorca:

Testne potrebščine: gel za ločevanje seruma, posoda za zbiranje vzorcev in gumijasti zamašek, kateter, tekočina za izpiranje katetra, prah za rokavice itd.

Antikoagulant: heparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), itd.;

Organska topila: izopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil sulfoksid, formamid, glicerin, PEG itd.;

Razkužila: alkoholi (etanol>1%), aldehidi, fenoli (fenol>0,2%), peroksidi, močne kisline (HCL), močne alkalije (NaOH) itd.;

Detergent:SDS (>0,005%);

Prst: Humus

Barvilo: Indigo

drugo.

V dejanskih pogojih vzorčenja na prostem, kot je zbiranje vzorcev iz okolja, lahko vzorci vsebujejo različne moteče snovi, sestava motečih snovi na vsaki lokaciji pa je drugačna, zaradi česar je treba izvesti poskuse motenj PCR v skladu z lokalnimi pogoji.

IV.Pogoji shranjevanja in prevoza vzorcev

Sveže odvzete klinične vzorce je treba poslati v laboratorij v 2 do 4 urah po odvzemu pri 2 °C do 8 °C.Shranjujte pri 4 ℃ v 24 urah.Vzorce, uporabljene za izolacijo virusa in odkrivanje nukleinske kisline, je treba testirati čim prej.Vzorce, ki jih je mogoče testirati v 24 urah, lahko shranite pri 4 °C;vzorce, ki jih ni mogoče zaznati v 24 urah, je treba shraniti pri -70 °C ali manj (če ne - Shranjujte pri 70 °C v hladilniku pri -20 °C).

Povzetek:Standardizirano zbiranje, transport in shranjevanje vzorcev so bistvenega pomena za nadaljnje testiranje.Lažni negativi mnogih laboratorijskih testov so posledica nepravilnega zbiranja, transporta in shranjevanja vzorcev, ki vodijo do razgradnje virusne nukleinske kisline.Vendar številni laboratoriji še vedno zanemarjajo pomen vzorčenja.Upam, da bo ta članek zbudil pozornost vseh do vzorčenja in naredil bolj znanstveno in razumno vzorčenje!

Sorodni izdelek:

Komplet za odkrivanje različice nukleinske kisline SARS-CoV-2 (I) (metoda multipleksne PCR fluorescentne sonde) – za odkrivanje mutantov iz Brazilije, Južne Afrike in Združenega kraljestva