Nasveti za izboljšanje obnovitve lepila

1. Med elektroforezo povečajte količino vzorca.

2. Uporabite sveže pripravljen pufer za elektroforezo.

3. Pri rezanju lepila poskusite rezati samo lepilo s trakovi, da zmanjšate količino rezanja lepila: ne potrebujete lepila z malo namenskimi fragmenti, sicer bo to vplivalo na stopnjo okrevanja.

4. Ko stopite dva ali več kosov lepila, uporabite epruveto ne glede na to, kako velika je prostornina, in jo prenesite v isto kolono.

5. Raztopine, dodane v sol, je lahko nekoliko več, kar je bolj ugodno za vezavo DNA na membrano, vendar na splošno ne presega 750 ul.

6. Ključ do pridobivanja gela je vezava DNK na kolono prek koncentracije soli, kislosti (naboja) in hidrofobnosti raztopine v koloni.Če je torej pH pufra za elektroforezo previsok, lahko soli dodamo 10 ul (pH 5,0, 3 mol/L NaAC);da bi bolje prestregli molekule DNA na membrani, lahko po raztapljanju lepila dodamo 30% izopropanol, ki se segreje v tekočino.

7. Preden dodate eluent, pustite kolono na sobni temperaturi nekaj minut (približno 10 minut), da etanol popolnoma izhlapi.

8. Nazadnje dodajte manj eluenta, da zmanjšate prostornino za pridobitev.Na splošno se za elucijo uporablja 30-50 μl eluenta (ne premalo, sicer ne bo mogel zmočiti membrane, kar ni primerno za elucijo);elucijske kapljice so v središču membrane, da popolnoma eluirajo DNA, vezano na membrano.

9. Po dodajanju eluenta ga lahko 5 minut eluiramo v vodni kopeli pri 55 stopinjah ali postavimo v vodno kopel pri 50 stopinjah za več kot 10 minut ali zapremo s parafilmom pri 4 stopinjah čez noč in nato naslednji dan centrifugiramo za obnovitev, učinek je dober.

10. Dodajte centrifugiran eluat nazaj v adsorpcijsko kolono in ponovno centrifugirajte.

Podrobne metode in postopki za pridobivanje produkta PCR

1. Recikliranje navadne gume

Če želite obnoviti lepilo, je najbolje uporabiti komplet, ki je priročen in ima nekoliko višjo stopnjo obnovitve.Če ga res morate obnoviti ročno, lahko po rezanju lepila dodate 3-kratno količino TE.Po taljenju v vodni kopeli se fenol, fenol/kloroform čisto ekstrahirajo in etanol obori.To je to.

2. Pridobivanje DNK iz gelov z nizkim tališčem

Čiščenje fragmentov DNK Dodajte TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmol/l EDTA), ki je enak volumnu gela, in postavite v vodno kopel pri 65 °C za 5 minut, da se gel popolnoma raztopi.

Ko smo jo segreli na sobno temperaturo, smo dodali enako količino fenola (nasičenega s TE, TE smo zaprli v zgornjo plast, spodnjo plast fenola pa odstranili) in zmes nežno premešali (mešanje ni potrebno) in centrifugirali pri 12.000 obratih na minuto 3 minute.Ponovite 1-2 krat.

Vzemite supernatant, dodajte 0,1 volumna 3 mol/L natrijevega acetata (pH 5,2) in 2,5-kratni volumen absolutnega etanola, da izvedete obarjanje z etanolom.Očiščeno DNK raztopimo z ustrezno količino TE, izmerimo vsebino in pripravimo za uporabo (uporabimo jo lahko za analizo strukture ciljnega gena, pripravo sonde itd.).

3. Okrevanje PCR z dobro specifičnostjo pomnoževanja

Če je specifičnost pomnoževanja PCR dobra, gre le za preprosto čiščenje in predelavo produkta PCR.Izdelku PCR lahko dodate 50 ug/ml proteinaze K, 37 stopinj za 1 uro, enkrat ekstrahirate s fenolom/kloroformom, enkrat ekstrahirate s kloroformom in dodate 0,1 volumna supernatanta.Natrijev acetat smo pridobili z obarjanjem z 2,5 volumni absolutnega etanola.

Podobni izdelki:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/