Protitelesa, imenovana tudi imunoglobulini (Ig), so glikoproteini, ki se specifično vežejo na antigene.
 
Konvencionalni pripravek protiteles se pripravi z imunizacijo živali in zbiranjem antiseruma.Zato antiserum običajno vsebuje protitelesa proti drugim nesorodnim antigenom in drugim beljakovinskim komponentam v serumu.Molekule splošnega antigena večinoma vsebujejo več različnih epitopov, zato so tudi običajna protitelesa mešanica protiteles proti več različnim epitopom.Celo običajna serumska protitelesa, usmerjena proti istemu epitopu, so še vedno sestavljena iz heterogenih protiteles, ki jih proizvajajo različni B-celični kloni.Zato običajna serumska protitelesa imenujemo tudi poliklonska protitelesa ali na kratko poliklonska protitelesa.
 
Monoklonsko protitelo (monoklonsko protitelo) je zelo enotno protitelo, ki ga proizvaja en sam celični klon B in je usmerjeno samo proti specifičnemu epitopu.Običajno se pripravi s tehnologijo hibridoma – tehnologija hibridomskih protiteles temelji na tehnologiji celične fuzije, ki združuje B-celice s sposobnostjo izločanja specifičnih protiteles in mielomske celice z neskončno rastno sposobnostjo v B-celične hibridome.Ta hibridomska celica ima lastnosti matične celice.Lahko se neomejeno in nesmrtno razmnožuje in vitro kot mielomske celice ter lahko sintetizira in izloča specifična protitelesa kot vranični limfociti.S kloniranjem lahko pridobimo monoklonsko linijo, pridobljeno iz ene same hibridomske celice, to je hibridomsko celično linijo.Protitelesa, ki jih proizvaja, so zelo homogena protitelesa proti isti antigenski determinanti, to je monoklonska protitelesa.
 
Protitelesa obstajajo kot en ali več monomerov v obliki črke Y (tj. monoklonska protitelesa ali poliklonska protitelesa).Vsak monomer v obliki črke Y je sestavljen iz 4 polipeptidnih verig, vključno z dvema enakima težkima verigama in dvema enakima lahkima verigama.Lahka in težka veriga sta poimenovani glede na njuno molekulsko maso.Vrh strukture v obliki črke Y je variabilna regija, ki je mesto vezave antigena.(Izvleček iz Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Struktura protiteles
Težka veriga
Obstaja pet vrst težkih verig Ig sesalcev, poimenovanih z grškimi črkami α, δ, ε, γ in μ.Ustrezna protitelesa se imenujejo IgA, IgD, IgE, IgG in IgM.Različne težke verige se razlikujejo po velikosti in sestavi.α in γ vsebujeta približno 450 aminokislin, medtem ko μ in ε vsebujeta približno 550 aminokislin.
Vsaka težka veriga ima dve regiji: konstantno regijo in variabilno regijo.Vsa protitelesa iste vrste imajo enako konstantno regijo, vendar obstajajo razlike med protitelesi različnih vrst.Konstantne regije težkih verig γ, α in δ so sestavljene iz treh domen Ig v tandemu, z zgibno regijo za povečanje njene prožnosti;konstantni regiji težkih verig μ in ε sta sestavljeni iz 4 Ig domen.Variabilna regija težke verige protitelesa, ki jo proizvajajo različne celice B, je različna, vendar je variabilna regija protitelesa, ki jo proizvaja ista celica B ali celični klon, enaka in variabilna regija vsake težke verige je dolga približno 110 aminokislin., In tvorijo eno domeno Ig.
 
Lahka veriga
Pri sesalcih obstajata samo dve vrsti lahkih verig: tip lambda in tip kapa.Vsaka lahka veriga ima dve povezani domeni: konstantno regijo in variabilno regijo.Dolžina lahke verige je približno 211-217 aminokislin.Dve lahki verigi v vsakem protitelesu sta vedno enaki.Pri sesalcih ima lahka veriga v vsakem protitelesu samo eno vrsto: kapa ali lambda.Pri nekaterih nižjih vretenčarjih, kot so hrustančne ribe (hrustančne ribe) in kostne ribe, najdemo tudi druge vrste lahkih verig, kot je jota (jota).
 
Fab in Fc segmenta
Segment Fc je mogoče neposredno kombinirati z encimi ali fluorescenčnimi barvili za označevanje protiteles.To je del, kjer se protitelo zakoviči na ploščici med postopkom ELISA, in je tudi del, kjer se drugo protitelo prepozna in veže pri imunoprecipitaciji, imunoblotingu in imunohistokemiji.Protitelesa se lahko hidrolizirajo v dva segmenta F(ab) in en segment Fc s proteolitičnimi encimi, kot je papain, ali pa se lahko s pomočjo pepsina zlomijo iz območja tečaja in hidrolizirajo v en segment F(ab)2 in en segment Fc.Fragmenti protiteles IgG so včasih zelo uporabni.Zaradi pomanjkanja segmenta Fc se segment F(ab) ne bo oboril z antigenom, niti ga imunske celice ne bodo zajele v študijah in vivo.Zaradi majhnih molekularnih fragmentov in pomanjkanja funkcije navzkrižnega povezovanja (zaradi pomanjkanja segmenta Fc) se segment Fab običajno uporablja za radioaktivno označevanje v funkcionalnih študijah, segment Fc pa se v glavnem uporablja kot blokirno sredstvo pri histokemičnem barvanju.
 
Spremenljive in konstantne regije
Variabilna regija (V regija) se nahaja na 1/5 ali 1/4 (vsebuje približno 118 aminokislinskih ostankov) verige H blizu N-konca in 1/2 (vsebuje približno 108-111 aminokislinskih ostankov) blizu N-konca verige L.Vsaka regija V ima peptidni obroč, ki ga tvorijo disulfidne vezi znotraj verige, vsak peptidni obroč pa vsebuje približno 67 do 75 aminokislinskih ostankov.Sestava in razporeditev aminokislin v V regiji določata specifičnost vezave antigena protitelesa.Zaradi nenehno spreminjajočih se tipov in zaporedja aminokislin v regiji V lahko nastane veliko vrst protiteles z različnimi specifičnostmi vezave antigena.Območji V verige L in verige H se imenujeta VL oziroma VH.V VL in VH imata aminokislinska sestava in zaporedje nekaterih lokalnih regij večjo stopnjo variacije.Te regije se imenujejo hipervariabilne regije (HVR).Aminokislinska sestava in razporeditev delov, ki niso HVR, v regiji V sta razmeroma konzervativni, kar imenujemo ogrodna regija.V VL so tri hipervariabilne regije, ki se običajno nahajajo na aminokislinskih ostankih 24 do 34 oziroma 89 do 97.Trije HVR VL in VH se imenujejo HVR1, HVR2 in HVR3.Raziskava in analiza rentgenske kristalne difrakcije je dokazala, da je hipervariabilna regija res mesto, kjer se veže antigen protitelesa, zato jo imenujemo komplementarnost-determinirajoča regija (CDR).HVR1, HVR2 in HVR3 VL in VH lahko imenujemo CDR1, CDR2 oziroma CDR3.Na splošno ima CDR3 višjo stopnjo hipervariabilnosti.Hipervariabilna regija je tudi glavna lokacija, kjer obstajajo idiotipske determinante molekul Ig.V večini primerov ima veriga H pomembnejšo vlogo pri vezavi na antigen.
Konstantno območje (C območje)se nahaja na 3/4 ali 4/5 (približno od aminokisline 119 do konca C) verige H blizu konca C in 1/2 (vsebuje približno 105 aminokislinskih ostankov) blizu konca C verige L.Vsaka funkcionalna regija verige H vsebuje približno 110 aminokislinskih ostankov in vsebuje peptidni obroč, sestavljen iz 50-60 aminokislinskih ostankov, povezanih z disulfidnimi vezmi.Aminokislinska sestava in razporeditev te regije sta relativno konstantni v verigi istega živalskega izotipa L Ig in verigi istega tipa H.Enako, lahko se le specifično veže na ustrezen antigen, vendar je struktura njegove regije C enaka, to pomeni, da ima enako antigenost.Sekundarno protitelo proti človeškemu IgG (ali protitelo proti konju) se lahko kombinira z obema. Pojavi se kombinacija protiteles (IgG) proti različnim eksotoksinom.To je pomembna osnova za pripravo sekundarnih protiteles in uporabo fluoresceina, izotopov, encimov in drugih označenih protiteles.
 
 
Podobni izdelki:
Komplet Cell Direct RT-qPCR