Komplet Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Kompleti za neposredno lizo celic Cell Ready v enem koraku qRT-PCR kompleti
Opisi
Ta komplet uporablja edinstven sistem liznega pufra, ki lahko hitro sprosti RNA iz gojenih celičnih vzorcev za reakcije RT-qPCR, s čimer se odpravi zamuden in težaven postopek čiščenja RNA.Predlogo RNA lahko dobite v samo 7 minutah.5×Direct RT Mix in 2×Reagenti Direct qPCR Mix-SYBR, ki jih dobite v kompletu, lahko hitro in učinkovito pridobijo kvantitativne rezultate PCR v realnem času.
5×Direct RT Mix in 2×Direct qPCR Mix-SYBR ima močno toleranco za zaviralce in lizat vzorcev se lahko uporabi kot matrica neposredno za RT-qPCR.Ta komplet vsebuje edinstveno reverzno transkriptazo Foregene z visoko afiniteto RNA in DNA polimerazo Hot D-Taq, dNTP, MgCl2, reakcijski pufer, PCR optimizator in stabilizator.
Specifikacije
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sestavni deli kompleta
| del I | Medpomnilnik CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Medpomnilnik ST | |
| del II | DNK radirka |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX referenčno barvilo | |
| ddH2O brez RNaze | |
| Navodila | |
Značilnosti in prednosti
■Preprosto in učinkovito: s tehnologijo Cell Direct RT lahko vzorce RNA pridobite v samo 7 minutah.
■ Potreba po vzorcu je majhna, testirati je mogoče le 10 celic.
■ Visoka zmogljivost: lahko hitro zazna RNK v celicah, gojenih v ploščah s 384, 96, 24, 12 in 6 jamicami.
■ DNA Eraser lahko hitro odstrani sproščene genome in močno zmanjša vpliv na poznejše eksperimentalne rezultate.
■ Optimiziran sistem RT in qPCR naredi dvostopenjsko reverzno transkripcijo RT-PCR učinkovitejšo, PCR pa bolj specifično in bolj odporno na zaviralce reakcije RT-qPCR.
Aplikacija kompleta
Področje uporabe: gojene celice.
- RNA, sproščena z lizo vzorca: velja samo za predlogo RT-qPCR tega kompleta.
- Komplet se lahko uporablja za naslednje namene: analiza izražanja genov, preverjanje učinka utišanja genov, ki ga posreduje siRNA, presejanje zdravil itd.
Diagram
Shranjevanje in rok uporabnosti
Del I tega kompleta je treba hraniti pri 4 ℃;Del II je treba hraniti pri -20 ℃.
Foregene Protease Plus II je treba shraniti pri 4℃, ne zamrzujte pri -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR je treba shraniti pri -20℃v temi;ob pogosti uporabi ga lahko shranimo tudi pri 4℃ za kratkotrajno skladiščenje (porabite v 10 dneh).
Načela zasnove primerja PCR v realnem času
Forward Primer in Reverse Primer
Za PCR v realnem času je zasnova primerja zelo pomembna.Primerji so povezani s specifičnostjo in učinkovitostjo pomnoževanja PCR in jih je mogoče oblikovati ob upoštevanju naslednjih načel:
Dolžina primerja: 18-30bp.
GC vsebnost: 40-60 %.
Vrednost Tm: programska oprema za načrtovanje primerja, kot je Primer 5, lahko poda vrednost Tm primerja.Vrednosti Tm zgornjih in spodnjih primerjev morajo biti čim bližje.Uporabite lahko tudi formulo za izračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri izvajanju PCR je kot temperatura žarjenja običajno izbrana temperatura pod vrednostjo Tm primerja 5 °C (ustrezno zvišanje temperature žarjenja lahko poveča specifičnost reakcije PCR).
Primerji in produkti PCR:
Dolžina produkta PCR pomnoževanja primerja načrta je prednostno 100-150 bp.
V največji možni meri se je treba izogibati temeljnim premazom za oblikovanje v sekundarnem strukturnem območju šablone.
Izogibajte se nastanku 2 ali več komplementarnih baz med 3' koncema zgornjih in spodnjih primerjev.
Primer 3' končna baza ne more biti prisotna s 3 dodatnimi zaporednimi G ali C.
Sami primerji ne morejo imeti komplementarnih struktur, sicer se bo oblikovala lasna struktura, ki bo vplivala na pomnoževanje PCR.
ATCG je treba porazdeliti čim bolj enakomerno v zaporedju primerja, 3' terminalni bazi pa se je treba izogibati, saj T.
Dodatek 1: dopolnilni paket komponent kompleta Cell Direct RT-qPCR
1.Raztopina za lizo celic
|
| |||
| Sestavni deli kompleta (sistem za lizo s 24 vdolbinicami/vdolbinica) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| deljaz | Medpomnilnik CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Medpomnilnik ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| delII | DNK radirka | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT mešanica
|
| |
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX referenčno barvilo | 40 μl | 200 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Navodila za uporabo:
