(96 vdolbinic) komplet QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Opisi
The(96 vdolbinic) QuickEasyTM Komplet Cell Direct RT-qPCR–SYBR Zelena Iprispevaedinstven puferski sistem za lizoto hitro sprosti RNAiz kultivirane celicevzorcev za reakcije RT-qPCR, kar odpravlja zamudno in napornoPostopek čiščenja RNA in traja le 7 minut, da pridobimo zahtevano predlogo RNA.The5× Direct RT Mixin2× Direct qPCR Mix-SYBRv škatli lahko hitro inučinkovito pridobiti kvantitativne podatke v realnem časurezultati PCR.
5× Direct RT Mix in 2× Direct qPCR Mix-SYBR imata močno toleranco za inhibitorje in lahko uporabita lizat vzorca za testiranje kot predlogo za učinkovito reverzno transkripcijo in specifično pomnoževanje.Reagent vsebuje Foregene edinstveno reverzno transkriptazo z visoko afiniteto za RNA, kot tudi vročo D-Taq DNA polimerazo, dNTP, MgCl2 , reakcijski pufer, PCR optimizator in stabilizator, in se lahko uporablja v povezavi z liznim pufrom za hitro, enostavno in natančno odkrivanje vzorca in ima značilnosti visoke občutljivosti, močne specifičnosti in dobre stabilnosti.
Komplet je namenjen mikrosistemski lizi gojenih celic s 96 jamicami in ima dobro enotnost in konsistenco;komponente kompleta zagotavljajo 96 reakcij lize, 96 reakcij reverzne transkripcije in 96 × 2 reakcij qPCR, ki lahko dosežejo ploščo s celicami s 96 vdolbinicami za enkratno uporabo, s čimer se izognejo onesnaženju, ki ga povzroči ponavljajoče se odpiranje, zamrzovanje in odmrzovanje reagentov ter poslabšanje učinkovitosti reagenta.
Sestavni deli kompleta
| Sestava kompleta ( 50 μL lizni sistem/20 μLRT reakcijski sistem /20μL qPCR reakcijski sistem) | DRT-03011 | Opomba | |
| 96T | |||
| delI | MedpomnilnikCL | 5 ml | CelicaLiza |
| ForegeneProteaza Plus II | 100 μL | ||
| MedpomnilnikST | 500 μL | ||
| del II | DNKRadirka | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× neposredna mešanica qPCR-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX referenčno barvilo | 400µL | ||
| RNaza- prostddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mletno | 1 kos | 1 porcija | |
*: Lizni reagent DNA Eraser je vključen v II. del kompleta;Komponente Cell Lysis, RT in qPCR je mogoče kupiti ločeno.
Značilnosti in prednosti
■Preprosto in učinkovito: s tehnologijo Cell Direct RT lahko vzorce RNA pridobite v samo 7 minutah.
■ Potreba po vzorcu je majhna, testirati je mogoče le 10 celic.
■ Visoka zmogljivost: lahko hitro zazna RNK v celicah, gojenih v ploščah s 384, 96, 24, 12 in 6 jamicami.
■ DNA Eraser lahko hitro odstrani sproščene genome in močno zmanjša vpliv na poznejše eksperimentalne rezultate.
■ Optimiziran sistem RT in qPCR naredi dvostopenjsko reverzno transkripcijo RT-PCR učinkovitejšo, PCR pa bolj specifično in bolj odporno na zaviralce reakcije RT-qPCR.
Aplikacija kompleta
Področje uporabe: gojene celice.
- RNA, sproščena z lizo vzorca: velja samo za predlogo RT-qPCR tega kompleta.
- Komplet se lahko uporablja za naslednje namene: analiza izražanja genov, preverjanje učinka utišanja genov, ki ga posreduje siRNA, presejanje zdravil itd.
Shranjevanje in rok uporabnosti
Del I tega kompleta je treba shraniti na 4℃;Del II je treba hraniti pri -20 ℃.
Foregene Protease Plus II je treba shraniti pri 4℃, ne zamrzujte pri -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman je treba shraniti pri -20℃v temi;ob pogosti uporabi ga lahko shranimo tudi pri 4℃ za kratkotrajno skladiščenje (porabite v 10 dneh).
Načela zasnove primerja PCR v realnem času
Forward Primer in Reverse Primer
Za PCR v realnem času je zasnova primerja zelo pomembna.Primerji so povezani s specifičnostjo in učinkovitostjo pomnoževanja PCR in jih je mogoče oblikovati ob upoštevanju naslednjih načel:
- Dolžina primerja: 18-30bp.
- GC vsebnost: 40-60 %.
- Vrednost Tm: programska oprema za načrtovanje primerja, kot je Primer 5, lahko poda vrednost Tm primerja.Vrednosti Tm zgornjih in spodnjih primerjev morajo biti čim bližje.Uporabite lahko tudi formulo za izračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri izvajanju PCR je kot temperatura žarjenja običajno izbrana temperatura pod vrednostjo Tm primerja 5 °C (ustrezno zvišanje temperature žarjenja lahko poveča specifičnost reakcije PCR).
- Primerji in produkti PCR:
- Dolžina produkta PCR pomnoževanja primerja načrta je prednostno 100-150 bp.
- V največji možni meri se je treba izogibati temeljnim premazom za oblikovanje v sekundarnem strukturnem območju šablone.
- Izogibajte se nastanku 2 ali več komplementarnih baz med 3' koncema zgornjih in spodnjih primerjev.
- Primer 3' končna baza ne more biti prisotna s 3 dodatnimi zaporednimi G ali C.
- Sami primerji ne morejo imeti komplementarnih struktur, sicer se bo oblikovala lasna struktura, ki bo vplivala na pomnoževanje PCR.
- ATCG je treba porazdeliti čim bolj enakomerno v zaporedju primerja, 3' terminalni bazi pa se je treba izogibati, saj T.
Dodatek1: Cell DirectRT-qPCR Sestavni del kompletat dopolnilni paket
1. Raztopina za lizo celic
| Raztopina za lizo celic | |||
| Sestavni deli kompleta (sistem za lizo s 24 vdolbinicami/vdolbinica) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| deljaz | Medpomnilnik CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Medpomnilnik ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| delII | DNK radirka | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT mešanica | |
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
| Mešanica qPCR | ||
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × referenčno barvilo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Navodila za uporabo:
