Komplet za izolacijo celotne živalske RNK Kompleti za ekstrakcijo in čiščenje celotne RNK za živalska tkiva in celice
Opis kompleta:
Hitro in učinkovito ekstrahirajte visoko čisto in kakovostno skupno RNK iz različnih živalskih tkiv.
Ni vam treba skrbeti za razgradnjo RNA.Celoten sistem je brez RNaze
Učinkovito odstranite DNK z DNA-Cleaning Column
Odstranite DNA brez dodajanja DNaze
Enostavno—vsi postopki se zaključijo pri sobni temperaturi
Hitro – operacijo lahko zaključite v 30 minutah
Varno - ni uporabljen organski reagent
Visoka čistost—OD260/280≈1,8-2,1
Opisi kompletov
50 priprav, 200 priprav
Ta komplet uporabljaspin stolpec in formulaRazvito v našem podjetju, ki lahko z visoko učinkovitostjo ekstrahira visoko čisto in visokokakovostno celotno RNK iz različnih živalskih tkiv. Zagotavlja učinkovito kolono za čiščenje DNK, ki lahko enostavno loči in adsorbira genomsko DNK iz supernatanta in tkivnega lizata, preprosto in prihrani čas;Kolona samo za RNA lahko učinkovito veže RNA in jo je mogoče hkrati obdelati z edinstveno formulo. Veliko vzorcev.
Celoten sistem je brez RNaze, tako da se ekstrahirana RNA ne razgradi;Buffer RW1, Buffer RW2 pralni sistem pufra, tako da pridobljena RNA ne vsebuje beljakovin, DNA, ionov in onesnaženja z organskimi spojinami.
Sestavni deli kompleta
| Komplet za izolacijo celotne živalske RNA | ||
| Sestavni deli kompleta | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Medpomnilnik RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Medpomnilnik RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Medpomnilnik RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Medpomnilnik RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH2O brez RNaze | 10 ml | 40 ml |
| Stolpec samo za RNA | 50 | 200 |
| Kolona za čiščenje DNK | 50 | 200 |
| Navodila | 1 kos | 1 kos |
Informacije o izdelku
| Oblika | Spin stolpec | Čistilna komponenta | Foregene kolona, reagent |
| Flux | 1-24 vzorcev | Čas na pripravo | ~30 min (24 vzorcev) |
| Centrifuga | Namizna centrifuga | Ločevanje s pirolizo | Centrifugalna separacija |
| Vzorec | Živalsko tkivo;celica | Količina vzorcev | Tkivo: 10-20 mg;Celica:(1-5)×106 |
| Volumen elucije | 50-200 μL | Največja prostornina nakladanja | 850 μL |
Značilnosti in prednosti
■ Ni vam treba skrbeti za razgradnjo RNA;celoten sistem je brez RNaze
■ Učinkovito odstranite DNK z DNA-Cleaning Column
■ Odstranite DNA brez dodajanja DNaze
■ Enostavno – vsi postopki se zaključijo pri sobni temperaturi
■ Hitro - operacijo lahko zaključite v 30 minutah
■ Varno - organski reagent ni potreben
■ Visoka čistost -OD260/280≈1,8-2,1
Aplikacija kompleta
Primeren je za ekstrakcijo in čiščenje celotne RNK iz različnih svežih ali zamrznjenih živalskih tkiv ali gojenih celic.
Parametri izdelka
■ Nadaljnje aplikacije: sinteza prve verige cDNA, RT-PCR, molekularno kloniranje, Northern Blot itd.
■ Vzorci: živalska tkiva, gojene celice
■ Doziranje: Tkiva 10-20 mg, Celice (2-5) × 106
■ Največja kapaciteta vezave DNA čistilne kolone: 80 μg
■ Volumen elucije: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit zdravljena 20 mg
Sveže vzorce miši, vzemite 5 % prečiščene celotne RNA in 1 % agarja
Glikogelna elektroforeza
1: Vranica 2: Ledvica
3: Jetra 4: Srce
Shranjevanje in rok uporabnosti
Komplet lahko hranite 24 mesecev pri sobni temperaturi (15–25 ℃) ali 2–8 ℃ dlje časa.Pufer RL1 lahko hranite pri 4 ℃ 1 mesec po dodajanju β- merkaptoetanola (neobvezno).
Citirani članki
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Lipidom podobni nanodelci, obremenjeni z mRNA, za urejanje jetrne baze prek optimizacije osrednjega kompozitnega dizajna.Adv.Funk.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontana apoptoza celic v terapevtskem pripravku izvornih celic ima imunomodulatorne učinke s sproščanjem fosfatidilserina.Signal Transduct Target Ther.14. julij 2021; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ČE: 17,97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Modifikacija N7-metilgvanozina tRNA poveča onkogeno prevajanje mRNA in spodbuja napredovanje intrahepatičnega holangiokarcinoma.Celica Mol.29. julij 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ČE: 9,225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Modifikacija m6A, posredovana z Mettl14, olajša regeneracijo jeter z vzdrževanjem homeostaze endoplazmatskega retikuluma.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021; 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kompleti za izolacijo RNA za drugi vzorčni viriso na voljo:
Celica, rastlina, virus, kri itd.
RNA ni ekstrahirana ali pa je izkoristek RNA nizek
Pogosto obstajajo številni dejavniki, ki vplivajo na učinkovitost predelave, kot so: vsebnost RNA v vzorcu tkiva, način delovanja, volumen elucije itd.
1. Med delovanjem je bilo izvedeno ledeno kopel ali kriogeno (4 °C) centrifugiranje.
Priporočilo: Delujte pri sobni temperaturi (15-25 °C) skozi celoten postopek, ne uporabljajte ledene kopeli in centrifugirajte pri nizkih temperaturah.
2. Nepravilno konzerviranje vzorca ali predolg čas shranjevanja vzorca.
Priporočilo: Vzorce hranite pri -80 °C ali zamrznite v tekočem dušiku in se izogibajte ponavljajoči se uporabi pri zamrzovanju in odmrzovanju;poskusite uporabiti sveže tkivo ali gojene celice za ekstrakcijo RNK.
3. Nezadostna liza vzorca.
Priporočilo: Pri homogenizaciji tkiva zagotovite, da je tkivo dovolj homogenizirano in da so tkivne celice dovolj razcepljene, da pojasnite sproščanje RNK.
4. Eluent ni pravilno dodan.
Priporočilo: Potrdite, da je ddH brez RNaze2O dodamo po kapljicah na sredino membrane čistilne kolone.
5. Pufru RL2 ali pufru RW2 ni bil dodan pravilen volumen absolutnega etanola.
Priporočilo: Sledite navodilom, dodajte ustrezno količino absolutnega etanola v pufer RL2 in pufer RW2 ter dobro premešajte pred uporabo kompleta.
6. Odmerjanje vzorca tkiva ni primerno.
Priporočilo: Uporabite 10-20 mg tkiva ali (1-5) × 106celic na 500 μl pufra RL1, saj lahko prekomerna uporaba tkiva povzroči zmanjšano ekstrakcijo RNA.
7. Neustrezna količina elucije ali nepopolna elucija.
Priporočilo: Volumen elucije čistilne kolone je 50-200 μl;če učinek elucije ni zadovoljiv, je priporočljivo podaljšati čas namestitve pri sobni temperaturi po dodajanju predhodno segretega ddH brez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Čistilna kolona ima ostanek etanola po pranju s pufrom RW2.
Priporočilo: Če po izpiranju pufra RW2 ostane ostanek etanola, prazne epruvete centrifugirajte 1 minuto, čas za operacijo centrifugiranja praznih epruvet lahko podaljšate na 2 minuti ali pa čistilno kolono postavite na sobno temperaturo za 5 minut, da ustrezno odstranite preostali etanol.
Očiščena RNA se razgradi
Kakovost očiščene RNA je povezana z dejavniki, kot so ohranitev vzorca, kontaminacija z RNazo in manipulacija itd.
1. Vzorci tkiv se ne hranijo pravočasno.
Priporočilo: Če vzorcev tkiva ali celic po odvzemu ne uporabite pravočasno, jih takoj kriokonzervirajte pri -80 °C ali v tekočem dušiku.Če želite ekstrahirati RNK, uporabite na novo odvzet vzorec tkiva ali celice, kadar koli je to mogoče.
2. Ponavljajoče zamrzovanje-odmrzovanje vzorcev tkiva.
Priporočilo: Pri shranjevanju vzorcev tkiv je najbolje, da jih razrežete na majhne koščke za konzerviranje in odstranite enega od kosov, ko jih uporabljate, da se izognete ponavljajočemu zamrzovanju-odmrzovanju vzorca in razgradnji RNK.
3. RNazo vnašamo ali med operacijo ne nosimo rokavic za enkratno uporabo, maske itd.
Priporočilo: Eksperimente z ekstrakcijo RNK je najbolje izvajati v ločenih prostorih za manipulacijo RNK, pred poskusom pa je miza počiščena.
Med poskusom nosite rokavice in maske za enkratno uporabo, da zmanjšate razgradnjo RNK, ki jo povzroči vnos RNaze.
4. Reagenti so med uporabo kontaminirani z RNazo.
Priporočilo: zamenjajte z novim kompletom za izolacijo celotne živalske RNA za sorodne poskuse.
5. Centrifugalne epruvete, konice itd., ki se uporabljajo pri manipulaciji z RNK, so kontaminirane z RNazo.
Priporočilo: Potrdite, da centrifugalne epruvete, konice, pipete itd., ki se uporabljajo pri ekstrakciji RNK, ne vsebujejo RNaze.
Prečiščena pridobljena RNA vpliva na nadaljnje poskuse
RNA, prečiščena s čistilno kolono, če je vsebnost solnih ionov, beljakovin prevelika, bo vplivala na spodnji poskus, kot je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluirana RNA ima ostanke solnih ionov.
Priporočilo: potrdite, da je bila pufru RW2 dodana ustrezna prostornina etanola, in izvedite 2 izpiranji čistilne kolone pri centrifugalni hitrosti, ki je navedena za delovanje;če je kakršen koli ostanek solnih ionov, pustite čistilno kolono pufru RW2 5 minut pri sobni temperaturi in izvedite centrifugiranje, da povečate odstranitev kontaminacije s soljo.
2. Ostanek etanola v eluirani RNA.
Priporočilo: potrdite, da po izpiranju pufra RW2 izvedite operacijo centrifugiranja prazne epruvete pri hitrosti centrifugiranja, ki je navedena za delovanje, podaljšajte čas operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minuti, če je še vedno ostanek etanola, ali pustite na sobni temperaturi 5 minut po centrifugiranju prazne epruvete, da čim bolj povečate odstranitev ostankov etanola.
