Cell Direct RT qPCR Kit – Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kompleti za qRT-PCR v enem koraku Sonda
Opisi
Ta izdelek uporablja edinstven sistem liznega pufra za hitro sproščanje RNA iz kultiviranih celičnih vzorcev za reakcije RT-qPCR, s čimer odpravi zamuden in naporen postopek čiščenja RNA in samo 7 minut za pridobitev zahtevane predloge RNA, s 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, ki ga zagotavlja komplet, lahko hitro in učinkovito pridobi kvantitativne rezultate PCR v realnem času.
5× Direct RT Mix in 2× Direct qPCR Mix-Taqman imata močno toleranco za inhibitorje in lahko izvajata učinkovito obračanje in specifično pomnoževanje z uporabo lizata vzorca, ki ga je treba izmeriti, kot predloge.Reagent vsebuje Foregene reverzno transkriptazo, vročo D-Taq DNA polimerazo, dNTP, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer in Stabilizer, ki se lahko uporablja z liznim pufrom za hitro in preprosto odkrivanje vzorcev in ima značilnosti visoke občutljivosti, specifičnosti in stabilnosti.
Specifikacije
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sestavni deli kompleta
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Sestavni deli kompleta 20 μl qPCR Reaction System | DRT-01021 | DRT-01022 | Opomba | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
del I | Medpomnilnik CL | 4 ml | 20 ml | Celična liza |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Medpomnilnik ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
del II | DNK radirka | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX referenčno barvilo | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Navodila | 1 kos | 1 kos | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman je mogoče kupiti posebej
Značilnosti in prednosti
■Preprosto in učinkovito: s tehnologijo Cell Direct RT lahko vzorce RNA pridobite v samo 7 minutah.
■ Potreba po vzorcu je majhna, testirati je mogoče le 10 celic.
■ Visoka zmogljivost: lahko hitro zazna RNK v celicah, gojenih v ploščah s 384, 96, 24, 12 in 6 jamicami.
■ DNA Eraser lahko hitro odstrani sproščene genome in močno zmanjša vpliv na poznejše eksperimentalne rezultate.
■ Optimiziran sistem RT in qPCR naredi dvostopenjsko reverzno transkripcijo RT-PCR učinkovitejšo, PCR pa bolj specifično in bolj odporno na zaviralce reakcije RT-qPCR.
Aplikacija kompleta
Področje uporabe: gojene celice.
- RNA, sproščena z lizo vzorca: velja samo za predlogo RT-qPCR tega kompleta.
- Komplet se lahko uporablja za naslednje namene: analiza izražanja genov, preverjanje učinka utišanja genov, ki ga posreduje siRNA, presejanje zdravil itd.
Shranjevanje in rok uporabnosti
Del I tega kompleta je treba shraniti na 4℃;Del II je treba hraniti pri -20 ℃.
Foregene Protease Plus II je treba shraniti pri 4℃, ne zamrzujte pri -20 ℃.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman je treba shraniti pri -20℃v temi;ob pogosti uporabi ga lahko shranimo tudi pri 4℃ za kratkotrajno skladiščenje (porabite v 10 dneh).
Načela zasnove primerja PCR v realnem času
Forward Primer in Reverse Primer
Za PCR v realnem času je zasnova primerja zelo pomembna.Primerji so povezani s specifičnostjo in učinkovitostjo pomnoževanja PCR in jih je mogoče oblikovati ob upoštevanju naslednjih načel:
- Dolžina primerja: 18-30bp.
- GC vsebnost: 40-60 %.
- Vrednost Tm: programska oprema za načrtovanje primerja, kot je Primer 5, lahko poda vrednost Tm primerja.Vrednosti Tm zgornjih in spodnjih primerjev morajo biti čim bližje.Uporabite lahko tudi formulo za izračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri izvajanju PCR je kot temperatura žarjenja običajno izbrana temperatura pod vrednostjo Tm primerja 5 °C (ustrezno zvišanje temperature žarjenja lahko poveča specifičnost reakcije PCR).
- Primerji in produkti PCR:
- Dolžina produkta PCR pomnoževanja primerja načrta je prednostno 100-150 bp.
- V največji možni meri se je treba izogibati temeljnim premazom za oblikovanje v sekundarnem strukturnem območju šablone.
- Izogibajte se nastanku 2 ali več komplementarnih baz med 3' koncema zgornjih in spodnjih primerjev.
- Primer 3' končna baza ne more biti prisotna s 3 dodatnimi zaporednimi G ali C.
- Sami primerji ne morejo imeti komplementarnih struktur, sicer se bo oblikovala lasna struktura, ki bo vplivala na pomnoževanje PCR.
- ATCG je treba porazdeliti čim bolj enakomerno v zaporedju primerja, 3' terminalni bazi pa se je treba izogibati, saj T.
Dodatek1: Cell DirectRT-qPCR Sestavni del kompletat dopolnilni paket
1. Raztopina za lizo celic
| Raztopina za lizo celic | |||
| Sestavni deli kompleta (sistem za lizo s 24 vdolbinicami/vdolbinica) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| deljaz | Medpomnilnik CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Medpomnilnik ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| delII | DNK radirka | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT mešanica | |
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
| Mešanica qPCR | ||
| Sestavni deli kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × referenčno barvilo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH brez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Navodila za uporabo:
