PCR v realnem času Easyᵀᴹ-Taqman
Opisi kompletov
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman, ki ga zagotavlja Real Time PCR EasyTM-Taqman kit je nov sistem predmešanja, ki uporablja posebne fluorescentne sonde za reakcije pomnoževanja PCR v realnem času, kar lahko močno izboljša specifičnost izdelka in občutljivost reakcije.ROX je na voljo kot notranje kontrolno barvilo.
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman vsebuje Foregene edinstveno Taq DNA polimerazo za vroč zagon.V primerjavi z običajnimi encimi Taq ima prednosti visoke učinkovitosti pomnoževanja, močne specifične sposobnosti pomnoževanja in nizke stopnje neusklajenosti.Zmanjša lahko nespecifično pomnoževanje in izboljša natančnost PCR.
Specifikacije
Enostaven PCR v realnem časuTM-Taqman | ||||
Sestava kompleta (20μl sistem) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Pravi PCRenostavnoTMZmešajte-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×Referenčno barvilo ROX | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
ddH brez DNaze2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Inavodilo | 1 | 1 | 1 | 1 |
Značilnosti in prednosti
■ Enostavno—2X PCR mešanica za zmanjšanje poskusne napake in časa delovanja
■ Specifičen—optimiziran pufer in encim Taq za vroč zagon lahko preprečita nespecifično pomnoževanje in tvorbo dimerja primerja
■ Visoka občutljivost—lahko zazna majhne kopije predloge
■ Dobra vsestranskost—združljivost z večino instrumentov za kvantitativno PCR v realnem času
Aplikacija kompleta
analiza qPCR
Potek dela
Grafični
Shranjevanje in rok uporabnosti
Ta komplet shranjujte zaščiteno pred svetlobo in pri -20 ℃.Ob pogosti uporabi ga lahko kratek čas (10 dni) hranimo tudi pri 4℃.
Ni ojačanih signalov
1. Taq DNA polimeraza v kompletu izgubi svojo aktivnost zaradi nepravilnega shranjevanja ali izteka roka uporabnosti kompleta.
Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanja kompleta;znova dodajte ustrezno količino Taq DNA polimeraze sistemu PCR ali kupite nov komplet PCR v realnem času za sorodne poskuse.
2. V predlogi DNK je veliko zaviralcev Taq DNA polimeraze.
Predlog: ponovno prečistite predlogo ali zmanjšajte količino uporabljene predloge.
3. Koncentracija Mg2+ ni primerna.
Priporočilo: Koncentracija Mg2+ mešanice 2× Real PCR, ki jo nudimo, je 3,5 mM.Pri nekaterih posebnih primerjih in šablonah pa je lahko koncentracija Mg2+ višja.Zato lahko neposredno dodate MgCl2, da optimizirate koncentracijo Mg2+.Za optimizacijo je priporočljivo povečati Mg2+ za 0,5 mM vsakič.
4. Pogoji pomnoževanja PCR niso primerni, zaporedje ali koncentracija primerja pa je neustrezna.
Predlog: potrdite pravilnost zaporedja primerja in primer ni bil razgrajen;če ojačanje signala ni dobro, poskusite znižati temperaturo žarjenja in ustrezno prilagoditi koncentracijo primerja.
5. Količina predloge je premajhna ali prevelika.
Priporočilo: Izvedite redčenje z linearizacijo predloge z gradientom in izberite koncentracijo predloge z najboljšim učinkom PCR za poskus PCR v realnem času.
NTC ima previsoko vrednost fluorescence
1. Kontaminacija z reagentom med delovanjem.
Priporočilo: Zamenjajte z novimi reagenti za poskuse PCR v realnem času.
2. Med pripravo reakcijskega sistema PCR je prišlo do kontaminacije.
Priporočilo: Med delom izvajajte potrebne zaščitne ukrepe, kot so: nošenje rokavic iz lateksa, uporaba pipete s filtrom itd.
3. Primerji se razgradijo, razgradnja primerjev pa bo povzročila nespecifično pomnoževanje.
Predlog: Uporabite elektroforezo SDS-PAGE, da ugotovite, ali so primerji razgrajeni, in jih zamenjajte z novimi primerji za poskuse PCR v realnem času.
Primerni dimer ali nespecifična amplifikacija
1. Koncentracija Mg2+ ni primerna.
Priporočilo: Koncentracija Mg2+ mešanice 2× Real PCR EasyTM Mix, ki jo nudimo, je 3,5 mM.Pri nekaterih posebnih primerjih in šablonah pa je lahko koncentracija Mg2+ višja.Zato lahko neposredno dodate MgCl2, da optimizirate koncentracijo Mg2+.Za optimizacijo je priporočljivo povečati Mg2+ za 0,5 mM vsakič.
2. Temperatura žarjenja PCR je prenizka.
Predlog: vsakič zvišajte temperaturo žarjenja PCR za 1 ℃ ali 2 ℃.
3. Izdelek PCR je predolg.
Priporočilo: Dolžina produkta PCR v realnem času mora biti med 100-150 bp, ne več kot 500 bp.
4. Primerji se razgradijo in razgradnja primerjev bo povzročila pojav specifičnega ojačanja.
Predlog: Uporabite elektroforezo SDS-PAGE, da ugotovite, ali so primerji razgrajeni, in jih zamenjajte z novimi primerji za poskuse PCR v realnem času.
5. Sistem PCR ni ustrezen ali pa je sistem premajhen.
Predlog: premajhen reakcijski sistem PCR bo povzročil zmanjšanje natančnosti zaznavanja.Najbolje je, da uporabite reakcijski sistem, ki ga priporoča instrument za kvantitativno PCR, da ponovno izvedete poskus PCR v realnem času.
Slaba ponovljivost kvantitativnih vrednosti
1. Instrument ne deluje pravilno.
Predlog: med vsako PCR luknjo instrumenta lahko pride do napak, kar povzroči slabo ponovljivost med upravljanjem temperature ali zaznavanjem.Preverite v skladu z navodili ustreznega instrumenta.
2. Čistost vzorca ni dobra.
Priporočilo: Nečisti vzorci bodo povzročili slabo ponovljivost poskusa, kar vključuje čistost predloge in primerjev.Najbolje je ponovno prečistiti šablono, primerje pa najbolje očistiti s SDS-PAGE.
3. Čas priprave in shranjevanja sistema PCR je predolg.
Predlog: Uporabite sistem PCR v realnem času za poskus PCR takoj po pripravi in ga ne puščajte predolgo.
4. Pogoji pomnoževanja PCR niso primerni, zaporedje ali koncentracija primerja pa je neustrezna.
Predlog: potrdite pravilnost zaporedja primerja in primer ni bil razgrajen;če ojačanje signala ni dobro, poskusite znižati temperaturo žarjenja in ustrezno prilagoditi koncentracijo primerja.
5. Sistem PCR ni ustrezen ali pa je sistem premajhen.
Predlog: premajhen reakcijski sistem PCR bo povzročil zmanjšanje natančnosti zaznavanja.Najbolje je, da uporabite reakcijski sistem, ki ga priporoča instrument za kvantitativno PCR, da ponovno izvedete poskus PCR v realnem času.