Pogosta vprašanja so zaKomplet za izolacijo celotne živalske RNA

Naslednja analiza težav, na katere lahko naletiteekstrakcija RNK živalskega tkiva/celice will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA ni ekstrahirana ali pa je izkoristek RNA nizek

Pogosto obstajajo številni dejavniki, ki vplivajo na učinkovitost predelave, kot so: vsebnost RNA v vzorcu tkiva, način delovanja, volumen elucije itd.

1. Med delovanjem je bilo izvedeno ledeno kopel ali kriogeno (4 °C) centrifugiranje.

Priporočilo: Delujte pri sobni temperaturi (15-25 °C) skozi celoten postopek, ne uporabljajte ledene kopeli in centrifugirajte pri nizkih temperaturah.

2. Nepravilno konzerviranje vzorca ali predolg čas shranjevanja vzorca.

Priporočilo: Vzorce hranite pri -80 °C ali zamrznite v tekočem dušiku in se izogibajte ponavljajoči se uporabi pri zamrzovanju in odmrzovanju;poskusite uporabiti sveže tkivo ali gojene celice za ekstrakcijo RNK.

3. Nezadostna liza vzorca.

Priporočilo: Pri homogenizaciji tkiva zagotovite, da je tkivo dovolj homogenizirano in da so tkivne celice dovolj razcepljene, da pojasnite sproščanje RNK.

4. Eluent ni pravilno dodan.

Priporočilo: Potrdite, da je ddH brez RNaze₂O dodamo po kapljicah na sredino membrane čistilne kolone.

5. Pufru RL2 ali pufru RW2 ni bil dodan pravilen volumen absolutnega etanola.

Priporočilo: Sledite navodilom, dodajte ustrezno količino absolutnega etanola v pufer RL2 in pufer RW2 ter dobro premešajte pred uporabo kompleta.

6. Odmerjanje vzorca tkiva ni primerno.

Priporočilo: Uporabite 10-20 mg tkiva ali (1-5) × 10⁶celic na 500 μl pufra RL1, saj lahko prekomerna uporaba tkiva povzroči zmanjšano ekstrakcijo RNA.

7. Neustrezna količina elucije ali nepopolna elucija.

Priporočilo: Volumen elucije čistilne kolone je 50-200 μl;če učinek elucije ni zadovoljiv, je priporočljivo podaljšati čas namestitve pri sobni temperaturi po dodajanju predhodno segretega ddH brez RNaze₂O, npr. 5-10 min.

8. Čistilna kolona ima ostanek etanola po pranju s pufrom RW2.

Priporočilo: Če po izpiranju pufra RW2 ostane ostanek etanola, prazne epruvete centrifugirajte 1 minuto, čas za operacijo centrifugiranja praznih epruvet lahko podaljšate na 2 minuti ali pa čistilno kolono postavite na sobno temperaturo za 5 minut, da ustrezno odstranite preostali etanol.

Očiščena RNA se razgradi

Kakovost očiščene RNA je povezana z dejavniki, kot so ohranitev vzorca, kontaminacija z RNazo in manipulacija itd.

1. Vzorci tkiv se ne hranijo pravočasno.

Priporočilo: Če vzorcev tkiva ali celic po odvzemu ne uporabite pravočasno, jih takoj kriokonzervirajte pri -80 °C ali v tekočem dušiku.Če želite ekstrahirati RNK, uporabite na novo odvzet vzorec tkiva ali celice, kadar koli je to mogoče.

2. Ponavljajoče zamrzovanje-odmrzovanje vzorcev tkiva.

Priporočilo: Pri shranjevanju vzorcev tkiv je najbolje, da jih razrežete na majhne koščke za konzerviranje in odstranite enega od kosov, ko jih uporabljate, da se izognete ponavljajočemu zamrzovanju-odmrzovanju vzorca in razgradnji RNK.

3. RNazo vnašamo ali med operacijo ne nosimo rokavic za enkratno uporabo, maske itd.

Priporočilo: Eksperimente z ekstrakcijo RNK je najbolje izvajati v ločenih prostorih za manipulacijo RNK, pred poskusom pa je miza počiščena.

Med poskusom nosite rokavice in maske za enkratno uporabo, da zmanjšate razgradnjo RNK, ki jo povzroči vnos RNaze.

4. Reagenti so med uporabo kontaminirani z RNazo.

Priporočilo: zamenjajte z novim kompletom za izolacijo celotne živalske RNA za sorodne poskuse.

5. Centrifugalne epruvete, konice itd., ki se uporabljajo pri manipulaciji z RNK, so kontaminirane z RNazo.

Priporočilo: Potrdite, da centrifugalne epruvete, konice, pipete itd., ki se uporabljajo pri ekstrakciji RNK, ne vsebujejo RNaze.

Prečiščena pridobljena RNA vpliva na nadaljnje poskuse

RNA, prečiščena s čistilno kolono, če je vsebnost solnih ionov, beljakovin prevelika, bo vplivala na spodnji poskus, kot je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.

1. Eluirana RNA ima ostanke solnih ionov.

Priporočilo: potrdite, da je bila pufru RW2 dodana ustrezna prostornina etanola, in izvedite 2 izpiranji čistilne kolone pri centrifugalni hitrosti, ki je navedena za delovanje;če je kakršen koli ostanek solnih ionov, pustite čistilno kolono pufru RW2 5 minut pri sobni temperaturi in izvedite centrifugiranje, da povečate odstranitev kontaminacije s soljo.

2. Ostanek etanola v eluirani RNA.

Priporočilo: potrdite, da po izpiranju pufra RW2 izvedite operacijo centrifugiranja prazne epruvete pri hitrosti centrifugiranja, ki je navedena za delovanje, podaljšajte čas operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minuti, če je še vedno ostanek etanola, ali pustite na sobni temperaturi 5 minut po centrifugiranju prazne epruvete, da čim bolj povečate odstranitev ostankov etanola.

Izolacija tipov vzorcev nulceinske kisline

Kompleti za izolacijo RNA Foregene lahko pridobijo popolno izolacijo/ekstrakcijo RNA iz naslednjih virov vzorcev: živalsko tkivo, rastlina, celice, virus, kri itd.

Kako shranim komplet

Shranjevanje pri sobni temperaturi 24 mesecev.