Buccal Swab/FTA Card Komplet za izolacijo DNA Komplet za ekstrakcijo ali čiščenje genomske DNA iz bukalnih brisov
Opis kompleta:
Hitro očistite visokokakovostno genomsko DNK iz vzorcev bukalnih brisov/FTA kartice.
◮Brez kontaminacije z RNazo:DNA-Only Column, ki je na voljo v kompletu, omogoča odstranitev RNA iz genomske DNA brez dodajanja RNaze med poskusom, kar preprečuje kontaminacijo laboratorija z eksogeno RNazo.
◮Hitra hitrost:Foregene Protease ima večjo aktivnost kot podobne proteaze in hitro prebavi vzorce tkiva;operacija je preprosta, operacijo ekstrakcije genomske DNA pa je mogoče zaključiti v 20-80 minutah.
◮Priročno:Centrifugiranje poteka pri sobni temperaturi in ni potrebe po nizkotemperaturnem centrifugiranju pri 4 °C ali obarjanju DNK z etanolom.
◮Varnost:Ekstrakcija organskega reagenta ni potrebna.
◮Visoka kvaliteta:Ekstrahirana genomska DNK ima velike fragmente, brez RNA, brez RNAze in izjemno nizko vsebnostjo ionov, kar lahko zadosti zahtevam različnih poskusov.
◮Mikroelucijski sistem:Lahko poveča koncentracijo genomske DNA, kar je priročno za nadaljnje odkrivanje ali eksperimentiranje.
Opis
Ta komplet zagotavlja učinkovito in hitro metodo za pridobivanje genomske DNK z visoko koncentracijo iz bukalnih brisov in kartice FTA (krvne lise).Uporaba našega podjetja'Z edinstveno centrifugalno kolono in formulo z membrano iz silicijevega dioksida, ki vsebuje samo DNA, v kombinaciji s Foregene proteazo je mogoče visoko koncentracijo in visokokakovostno genomsko DNK ekstrahirati v 80 minutah.Posebno oblikovana majhna čistilna kolona veže genomsko DNK in DNK je mogoče eluirati z majhno količino (15 μl) elucijski sistem za povečanje koncentracije pridobljene genomske DNA, kar je primerno za nadaljnje odkrivanje ali poskus.Komplet lahko obdeluje enega ali več vzorcev hkrati, postopek čiščenja pa ne zahteva ekstrakcije organskih snovi, kot so fenol, kloroform, in zamudnega obarjanja izopropanola ali etanola, operacija pa je enostavna in prihrani čas.
Specifikacije
50 priprav
Sestavni deli kompleta
| Medpomnilnik ST1 |
| Medpomnilnik ST2 |
| Linearni akrilamid |
| Medpomnilnik PW |
| Medpomnilnik WB |
| Medpomnilnik EB |
| Foregene proteaza |
| Stolpec samo za DNK |
| Navodila |
Značilnosti in prednosti
-Brez kontaminacije z RNazo: stolpec samo z DNK, ki je priložen kompletu, omogoča odstranitev RNK iz genomske DNK brez dodajanja RNaze med poskusom, s čimer preprečite kontaminacijo laboratorija z eksogeno RNazo.
-Hitra hitrost: Foregene Protease ima večjo aktivnost kot podobne proteaze, vzorce prebavi hitro;preprosto delovanje.
-Priročno: centrifugiranje poteka pri sobni temperaturi in ni potrebe po nizkotemperaturnem centrifugiranju pri 4 °C ali obarjanju DNK z etanolom.
-Varnost: ekstrakcija organskega reagenta ni potrebna.
-Visoka kakovost: Ekstrahirana genomska DNK ima velike fragmente, brez RNA, brez RNAze in izjemno nizko vsebnostjo ionov, kar lahko izpolni zahteve različnih poskusov.
-Sistem mikro elucije: lahko poveča koncentracijo genomske DNK, kar je primerno za odkrivanje ali eksperimentiranje na nižji stopnji.
Aplikacija kompleta
Primeren je za čiščenje genomske DNA iz naslednjih vzorcev: bukalni brisi, FTA kartica (krvni madeži).
Shranjevanje in rok uporabnosti
-Ta komplet lahko shranjujete 12 mesecev v suhih pogojih pri sobni temperaturi (15-25°C);če ga je treba hraniti dlje časa, ga lahko hranimo pri 2-8°C.
Opomba: Če je raztopina shranjena pri nizki temperaturi, je nagnjena k precipitaciji.Pred uporabo se prepričajte, da raztopino v kompletu za nekaj časa postavite na sobno temperaturo.Po potrebi ga 10 minut segrevamo v vodni kopeli pri 37°C, da se oborina raztopi, in pred uporabo premešamo.
-Raztopina Foregene Protease ima edinstveno formulo, ki je aktivna pri daljšem shranjevanju na sobni temperaturi (3 mesece);njegova aktivnost in stabilnost bosta boljši pri 4°C, zato je priporočljivo, da ga hranite pri 4°C, ne pozabite, da ga ne hranite pri -20°C.
Čistilni stolpec je zamašen
V tem kompletu se pri operaciji ekstrakcije genomske DNK čistilna kolona neposredno adsorbira na vzorčni mešanici encimske lize brez koraka centrifugiranja, čistilna kolona pa je lahko blokirana zaradi nepopolne encimizacije in visoke viskoznosti vzorca.
Naslednji možni vzroki so naslednji:
1. Nepopolna encimska razgradnja vzorcev tkiv.
Priporočilo: Čas obdelave vzorca s Foregene Protease je mogoče ustrezno podaljšati ali pa supernatant vzeti po 5-minutnem centrifugiranju pri 12.000 obratih na minuto (~13.400 × g).
2. Prekomerna uporaba vzorcev tkiv ali velikih tkiv.
Priporočilo: Najbolje je, da v vzorcu ne presežete 1 bukalni bris;če je vzorec prevelik, ustrezno povečajte odmerek pufra ST1, Foregene Protease, pufra ST2.
3. Viskoznost vzorca je previsoka.
Priporočilo: Vzorce lahko pred ekstrakcijo genomske DNA ustrezno razredčimo z 10 mM Tris-HCl.
4. Fragmenti krvne kartice so bili posesani.
Priporočilo: Prehodni čas centrifugiranja v 6. koraku genomske ekstrakcije krvnih madežev (kartica FTA) je mogoče ustrezno podaljšati.
Nizek izkoristek ali brez DNK
Pogosto obstajajo številni dejavniki, ki vplivajo na izkoristek genomske DNK, vključno z izvorom vzorca, pogoji shranjevanja vzorca, pripravo vzorca, manipulacijo itd.
Med ekstrakcijo ni mogoče pridobiti genomske DNK
Možni vzroki so naslednji:
1. Nepravilno konzerviranje vzorcev ali predolgo shranjevanje vodi do razgradnje genomske DNK.
Priporočilo: Brisi ust naj bodo po možnosti sveže vzorčeni, konzerviranih brisov pa ni priporočljivo uporabljati za operacije ekstrakcije genomske DNA;vzorci madežev krvi morajo zagotoviti ustrezno kakovost in čas shranjevanja ne sme biti predolg.
2. Premajhna uporaba tkiva lahko povzroči, da ne pride do ekstrakcije ustrezne genomske DNK.
Priporočilo: Sledite navodilom za vzorčenje bukalnih brisov v vodniku za uporabo in obrišite čim večkrat, da se lahko na peroralni bris pritrdi dovolj celic za ekstrakcijo genomske DNK;za ekstrakcijo vzorca madežev krvi se lahko območje reza krvnih madežev ustrezno poveča.
3. Foregene Protease je nepravilno konzervirana, kar povzroči zmanjšanje njene aktivnosti ali inaktivacijo.
Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanja Foregene Protease ali jo zamenjajte z novo Foregene Protease za encimsko reakcijo.
4. Nepravilno shranjevanje kompleta ali čas shranjevanja je predolg, kar povzroči okvaro nekaterih komponent v kompletu.
Priporočilo: Kupite nov komplet za izolacijo DNK bukalnih brisov za sorodne postopke.
5. Pufer WB ne dodaja absolutnega etanola.
Priporočilo: Potrdite, da pufer WB doda pravilno količino absolutnega etanola.
6. Eluent ni pravilno dodan silikonski foliji.
Priporočilo: Dodajte kapljice predhodno segretega eluenta na 65 °C na sredino silikonske membrane in pustite pri sobni temperaturi 5 minut, da povečate učinkovitost eluiranja.
Izolirana genomska DNA z nizkim izkoristkom
Naslednji možni vzroki so naslednji:
1. Nepravilno konzerviranje vzorcev ali predolgo shranjevanje vodi do razgradnje genomske DNK.
Priporočilo: Zaželeno je, da so peroralni brisi sveže vzorčeni, konzerviranih brisov pa se ne sme uporabljati za ekstrakcijo genomske DNK.
2. Če je količina vzorca tkiva premajhna, bo vsebnost ekstrahirane genomske DNK manjša.
Priporočilo: Sledite navodilom za vzorčenje ustnega brisa v navodilih za uporabo in brišite čim večkrat, da se lahko na ustni bris pritrdi dovolj celic za ekstrakcijo genomske DNK.
3. Foregene Protease je nepravilno konzervirana, kar povzroči zmanjšanje njene aktivnosti ali inaktivacijo.
Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanja Foregene Protease ali jo zamenjajte z novo Foregene Protease za encimsko reakcijo.
4. Težave z eluentom.
Priporočilo: Za elucijo uporabite pufer EB;če uporabljaš ddH2O ali drugih eluentov, potrdite, da je pH eluata med 7,0–8,5.
5. Eluat ni pravilno dodan po kapljicah.
Priporočilo: dodajte kapljice eluenta na sredino silikonske membrane in pustite pri sobni temperaturi 5 minut, da povečate učinkovitost eluiranja.
6. Elucijska tekočina se nabira premalo.
Priporočilo: Uporabite eluent za elucijo genomske DNA, kot je zahtevano v navodilih, vsaj ne manj kot 15 μl.
Nizka čistost izolirane genomske DNA
Nizka čistost genomske DNK lahko privede do neuspeha ali nezadovoljivih rezultatov nadaljnjih poskusov, kot so: encimov ni mogoče razrezati, PCR ne more dobiti genskega fragmenta, ki nas zanima, itd.
Možni vzroki so naslednji:
1. Heteroproteinsko onesnaženje, RNK onesnaženje.
Analiza: Čistilna kolona ni bila oprana s pufrom PW;kolona za čiščenje s spiranjem pufra PW ni bila sprana s pravilno centrifugalno hitrostjo.
Priporočilo: Pred dodajanjem etanola se prepričajte, da v supernatantu ni oborine;očistite kolono za čiščenje v skladu z navodili in tega koraka ne smete izpustiti.
2. Onesnaženje z nečistimi ioni.
Analiza: kolona za čiščenje s spiranjem pufra WB je bila izpuščena ali sprana samo enkrat, kar je povzročilo preostalo ionsko kontaminacijo.
Priporočilo: Buffer WB 2-krat sperite po navodilih, da čim bolj odstranite ostanke ionov.
3. Kontaminacija encimov RNA.
Analiza: v pufer smo dodali tuje RNaze;Postopek izpiranja pufra PW je bil nepravilen, kar je povzročilo ostanke RNaze, kar je vplivalo na poskusne operacije RNA v smeri toka, kot je transkripcija in vitro.
Priporočilo: Kompleti za izolacijo nukleinske kisline serije Foregene lahko odstranijo RNK brez dodatnega dodajanja RNaze, zato kompletu za izolacijo DNK na kartici Buccal Swab/FTA Card ni treba dodajati RNaze;ne pozabite slediti navodilom za pralno čistilno kolono Buffer PW in tega koraka ne smete izpustiti.
4. Ostanek etanola.
Analiza: Pufer WB ni izvedel centrifugiranja praznih epruvet po izpiranju čistilne kolone.
Priporočilo: Izvedite pravilno centrifugiranje prazne epruvete v skladu z navodili.
5. Ostalo onesnaženje z nečistočami.
Analiza: Shranjeni ali posebni vzorci niso predhodno obdelani.
Priporočilo: Vzorec temeljito predhodno obdelajte po navodilih.
