Nizko razmerje A260/A230 običajno povzročijo nečistoče z največjo absorpcijsko valovno dolžino pri 230 nm.Poglejmo, kaj te nečistoče vključujejo:

• Pogosti onesnaževalci	Absorpcijska valovna dolžina	Učinek razmerja
  Beljakovine	~230nm in 280nm	Istočasno zmanjšanje A260/A 280in A260/A 280razmerja
  Gvanidinska sol	220-240 nm	Zmanjšajte A260/A 280razmerje
  fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm in 270nm	Zmanjšajte A260/A 280razmerje
  EDTA	~230nm	Zmanjšajte A260/A 280razmerje
  Etanol	230-240 nm	Zmanjšajte A260/A 280razmerje

 
 
 
Absorpcijska valovna dolžina in kontrastna vrednost pogostih onesnaževal

Pkontaminacija z roteinom
Onesnaženje z beljakovinami se lahko šteje za najpogostejše onesnaženje v procesu ekstrakcije nukleinske kisline.Beljakovine obstajajo med zgornjo in spodnjo vodno fazoorganskofaza .Onesnaženje bo hkrati zmanjšalo razmerje A260/A280 in A260/A230, razmerje A260/A230 pa se bo spremenilo bolj očitno kot razmerje A260/A280.
Med naknadnimiobratno prepisovanjeor qPCR reakcije, beljakovinski ostanki lahko zavirajo ali motijo ​​delovanje encimov.Najboljši način, da se izognete kontaminaciji z beljakovinami, je, da pri aspiraciji supernatanta upoštevate načelo "raje manj kot več, večkrat majhna količina".

2. Onesnaženje z gvanidinijem
hidroklorid (GuHCl) in gvanidin tiocianat (GTC) imata učinek denaturacije beljakovin, ki lahko med postopkom ekstrakcije nukleinske kisline hitro uničijo celične membrane, kar povzroči denaturacijo beljakovin in precipitacijo.Absorpcijska valovna dolžina GuHCl in GTC je med 220-240 nm,preostala gvanidinijeva sol bo zmanjšala razmerje A260/A230.Čeprav bo preostala gvanidinijeva sol zmanjšala razmerje,vpliv na nadaljnje poskuse je dejansko zanemarljiv.

3. Kontaminacija s trizolom
Glavna sestavina Trizola je fenol.Glavna funkcija fenola je liza celic in sproščanje beljakovin in snovi nukleinskih kislin v celicah.Čeprav lahko fenol učinkovito denaturira beljakovine, ne more popolnoma zavreti aktivnosti RNaze.Zato so 8-hidroksikinolin, gvanidin izotiocianat, β- merkaptoetanol itd. dodani TRIzolu za zaviranje endogene in eksogene RNaze.
Pri ekstrakciji celične RNK lahko Trizol hitro lizira celice in zavira nukleazo, ki se sprošča iz celic, preostali Trizol pa bo znatno zmanjšal razmerje A260/A230.
Način predelave: Pri centrifugiranju je treba upoštevati, da je fenol v Trizolu lahko topen v vodni fazi pri 4° in sobni temperaturi.

4. Ostanek etanola
Etanol se uporablja v končnem procesu za obarjanje DNK, medtem ko se raztapljajo ioni soli, ki so lahko vezani na DNK.Absorpcijska valovna dolžina najvišjeabsorpcijski vrhetanol je tudi pri 230-240 nm, karzmanjša tudi razmerje A260/A230.
Metodo za preprečevanje ostankov etanola je mogoče dvakrat ponoviti med končnim eluiranjem, vpihovanjedimna napadve minuti, da etanol popolnoma izhlapi, preden dodamo pufer za elucijo.
Vendar je treba vedeti, da je razmerje le ocenjevalni indeks kakovosti RNA.Če so zgoraj omenjene operacije strogo regulirane, odstopanje med razmerjem in standardnim obsegom ne bo imelo velikega vpliva na nadaljnje poskuse.
Podobni izdelki:
Komplet za izolacijo celotne živalske RNA
Komplet za izolacijo rastlinske celotne RNK
Cell Total RNA Isolation komplet
Plant Total RNA Isolation kit Plus