Vodnik za analizo problemov

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Nizek izkoristek ali brez DNK

Običajno obstaja veliko dejavnikov, ki vplivajo na izkoristek genomske DNK, vključno z izvorom vzorca, starostjo vzorca, pogoji shranjevanja vzorca in operacijo.

Med ekstrakcijo ni bilo mogoče pridobiti genomske DNK

1. Vzorci tkiv so nepravilno shranjeni ali predolgo shranjeni, kar povzroči degradacijo genomske DNK.

Priporočilo: Vzorce tkiva hranite v tekočem dušiku ali -20°C;poskusite uporabiti na novo zbrane vzorce za ekstrakcijo genomske DNK.

2. Premajhna količina vzorca lahko povzroči, da se ustrezna genomska DNK ne ekstrahira.

Predlog: Za vzorce tkiv, ki so bili shranjeni dlje časa ali imajo močno degradacijo genomske DNK, se lahko količina vzorcev tkiva ustrezno poveča, da se izloči precejšnja količina genomske DNK.Količina vzorca se lahko določi glede na potrebe DNK, vendar svež vzorec ne sme preseči 100 mg, suh vzorec pa ne sme preseči 30 mg.

3. Vzorec ni mlet s tekočim dušikom ali postavljen predolgo po tekočem dušiku.

Predlog: Med ekstrakcijo DNK je treba vzorec popolnoma zmleti s tekočim dušikom, da se razbije celična stena;po mletju prenesite prašek vzorca v PL1, predhodno segret na 65°C čim prej (ko se zmleti prah stopi, se bo genomska DNK začela hitro razgrajevati) .

4. Nepravilno shranjevanje Foregene Protease povzroči zmanjšano ali inaktivirano aktivnost.

Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanja Foregene Protease ali jo zamenjajte z novo Foregene Protease za encimsko hidrolizo.

5. Komplet je nepravilno shranjen ali predolgo shranjen, kar povzroča okvaro nekaterih komponent v kompletu.

Priporočilo: Kupite nov komplet za ekstrakcijo rastlinske genomske DNK za povezane operacije.

6. Nepravilna uporaba kompleta.

Predlog: Kupite komplet za izolacijo rastlinske DNK, ki je namenjen vzorcem za ekstrakcijo in čiščenje rastlinske genomske DNK.

7. Puffer WB brez dodajanja anvodni etanol.

Priporočilo: poskrbite, da boste v pufer WB dodali pravilno količino absolutnega etanola.

8. Eluent ni bil pravilno pokapljan na silicijevo membrano.

Predlog: Dodajte predhodno segreto eluent pri 65℃po kapljicah na sredino membrane silikagela in pustite na sobni temperaturi 5 minut, da povečate učinkovitost eluiranja.

Ekstrakcija za pridobitev genomske DNK z nizkim izkoristkom

1. Vzorec je nepravilno shranjen ali shranjen predolgo, kar povzroči razgradnjo genomske DNK.

Priporočilo: Vzorce tkiva hranite pri -20℃;poskusite uporabiti na novo zbrane vzorce tkiva za ekstrakcijo genomske DNK.

2. Če je količina vzorcev tkiva premajhna, bo ekstrahirana genomska DNK manjša.

Predlog: nekateri rastlinski vzorci so bogati z vodo, kot so vodne rastline, kot so alge itd., zato je mogoče odmerek ustrezno povečati ali pa vodo pred operacijo nekoliko dehidrirati.

3. Vzorci niso bili temeljito zmleti s tekočim dušikom ali pa so bili po mletju predolgo na sobni temperaturi.

Predlog: mletje tekočega dušika mora biti zadostno, celična stena vzorca pa mora biti čim bolj polomljena;takoj po mletju je treba vzorec prahu prenesti v 65℃predgret pufer PL1 za naslednji korak.

4. Ne uporabljate pravilnega kompleta.

Priporočilo: Za ekstrakcijo in čiščenje rastlinske genomske DNK uporabite namenski komplet za izolacijo rastlinske DNK.

5. Nepravilno shranjevanje Foregene Protease povzroči zmanjšano ali inaktivirano aktivnost.

Priporočilo: Preverite pogoje shranjevanja Foregene Protease ali jo zamenjajte z novo Foregene Protease za encimsko hidrolizo.

6. Težava z eluentom

Priporočilo: za elucijo uporabite pufer EB;če uporabljaš ddH₂O ali drugih eluentov, se prepričajte, da je pH eluenta med 7,0-8,5.

7. Eluent ne kaplja pravilno

Predlog: Prosimo, dodajte kapljico elucije na sredino silicijeve membrane in jo pustite pri sobni temperaturi 5 minut, da povečate učinkovitost eluiranja.

8. Volumen eluenta je premajhen

Predlog: Uporabite eluent za elucijo genomske DNA v skladu z navodili, vsaj ne manj kot 100μl.

Ekstrahirana genomska DNK z nizko čistostjo

Nizka čistost genomske DNK bo povzročila neuspeh ali slab učinek nadaljnjih poskusov, na primer: encima ni mogoče razrezati in fragmenta ciljnega gena ni mogoče pridobiti s PCR.

1. Razna kontaminacija z beljakovinami, kontaminacija z RNA.

Analiza: pufer PW ni bil uporabljen za izpiranje kolone;Pufer PW ni bil uporabljen za izpiranje kolone pri pravilni hitrosti centrifugiranja.

Predlog: poskusite zagotoviti, da v supernatantu ni oborine, ko gre supernatant skozi kolono;očistite kolono za čiščenje s pufrom PW v skladu z navodili in tega koraka ne smete izpustiti.

2. Onesnaženje z nečistimi ioni.

Analiza: Pralna kolona Buffer WB je bila izpuščena ali pa je bila sprana samo enkrat, kar je povzročilo preostalo ionsko kontaminacijo.

Priporočilo: dvakrat sperite s pufrom WB v skladu z navodili, da čim bolj odstranite ostanke ionov.

3. Kontaminacija z RNazo.

Analiza: Pufru se doda eksogena RNaza;nepravilna operacija pranja v pufru PW bo povzročila ostanke RNaze in vplivala na poskusne operacije RNA v smeri toka, kot je transkripcija in vitro.

Predlog: Kompleti za ekstrakcijo nukleinske kisline serije Foregene lahko odstranijo RNK brez dodatne RNaze in vsi reagenti v kompletu za izolacijo rastlinske DNA ne potrebujejo RNaze;očistite kolono za čiščenje s pufrom PW v skladu z navodili in tega koraka ne smete izpustiti.

4. Ostanki etanola.

Analiza: Po izpiranju čistilne kolone s pufrom WB prazne epruvete niso bile centrifugirane.

Priporočilo: Sledite navodilom za pravilno centrifugiranje praznih epruvet.

Navodila:

Priročnik z navodili za komplet za izolacijo rastlinske DNK