Komplet za neposredno RT-qPCR II
Opis kompleta:
◮Komplet Direct RT-qPCR, ki uporablja Foreasy Reverse Transcriptase in Foreasy HS Taq DNA Polymerase, ki ga razvija Foregene, z edinstvenim reakcijskim pufrom, omogoča ta komplet visoko odpornost in združljivost ter lahko neposredno testira reakcijo z uporabo Foregene Lysis sistema kot predloge.Ta komplet se lahko uporablja za komplet za odkrivanje nukleinske kisline COVID-19 in razvoj kompleta za odkrivanje nukleinske kisline drugih patogenih bakterij.
Opis
Komplet Direct RT-qPCR zagotavlja ločeno pakiran pufer RT-qPCR, visoko učinkovito DNA polimerazo Foreasy HS Taqin Foreasy reverzna transkriptaza (MMLV),zaradi česar je priročno za ustvarjanje zalednih kompletov in prilagajanje sistema v okviru preprostega preverjanja.
Komplet Direct RT-qPCR, ki uporablja Foreasy Reverse Transcriptase in Foreasy HS Taq DNA Polymerase, ki ga razvija Foregene, z edinstvenim reakcijskim pufrom, omogoča ta komplet visoko odpornost in združljivost ter lahko neposredno testira reakcijo z uporabo Foregene Lysis sistema kot predloge.Ta komplet se lahko uporablja za komplet za odkrivanje nukleinske kisline COVID-19 in razvoj kompleta za odkrivanje nukleinske kisline drugih patogenih bakterij.
Ta komplet je lahko neposredno in hitro sestavni del izdelka IVD.Potrebuje le enostavno preverjanje, brez ponovnega razvijanja.
Specifikacije
500T, 50.000T
Sestavni deli kompleta
| Vsebina kompleta (20 μL reakcijski sistem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rverzna transkriptaza (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polimeraza (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× neposredni RT-qPCRMedpomnilnik | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Navodilo | 1 | 1 |
Koraki delovanja
A: Pripravite predlogo in reagent
1. Pripravite pripravljeno šablono RNA (priporočljivo je, da za ekstrakcijo in čiščenje šablone RNA uporabite serijski komplet Foregene Total RNA Isolation Kit) ali izdelek za razbijanje vzorca (priporočljivo je uporabiti sistem Foregene Lysis), specifične primerje (10 μM) in druge ustrezne potrošne materiale, instrument.
2. Dajte 2× neposredni pufer RT-qPCR, ddH2O brez RNaze in 20× referenčno barvilo ROX (če je potrebno) v škatlo z ledom, tako da se ti naravno stopijo, in nežno premešajte.
B: Pripravite sistem RT-qPCR
Pridobite polovico volumna reakcijskega pufra reakcijskega sistema (na primer, če je volumen sistema 20 μL, mora dobiti 10 μL 2 × neposrednega pufra RT-qPCR). Zaustrezno količino encima, predlagamo, daM-MLV: 10-30 U/20 μL reakcijski sistem,TaqDNA polimeraza:1-2 U/20 μL reakcijski sistemto je naš predlog, preizkusite ga in prilagodite), dodajte šablono RNA, specifične primerje in sonde ter dodajte ddH brez RNaze2O do 20 μL.Specifično pripravo reakcijskega sistema RT-qPCR si lahko ogledate v naslednji tabeli 1.
Tabela 1: Priprava sistema RT-qPCR
| Komponenta | Glasnost | Končna koncentracija |
| 2× neposredni medpomnilnik RT-qPCR | 10 μL | 1× |
| Reverzna transkriptaza Foreasy (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polimeraza | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Predloga (RNA ali lizat) | X μL | |
| 20 × referenčno barvilo ROX | - | 1* |
| RNaze-FreeddH2O | (6,4-X) μl | |
| Skupna prostornina | 20 μL |
Opomba: Forward Primer in Reverse Primer sta specifična primerja ciljnega gena.Sistem qPCR je mogoče prilagoditi glede na praktične eksperimentalne modele in modele PCR.Za končno koncentracijo večine primerjev priporočamo 400 nM.Prilagodite količino specifičnih primerjev in sond glede na pripravljeno koncentracijo in priporočeno končno koncentracijo, prosimo.
1*: Izberite ustrezno končno koncentracijo referenčnega barvila ROX glede na različne kvantitativne instrumente PCR.Optimalna koncentracija referenčnega barvila ROX za običajne kvantitativne instrumente PCR je prikazana v naslednji tabeli:
| Kvantitativni PCR instrumenti | Končna koncentracija referenčnega barvila ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Prvi korak,itd. | 1 × (na primer dodajte 1 μl 20 × ROX Reference Dye v 20 μL reakcijski sistem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P in Mx4000 itd. | 0,5 × (na primer dodajte 0,5 μl 20 × ROX Reference Dye v 20 μL reakcijski sistem) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorf kvantitativni PCR instrument itd. | Brez referenčnega barvila ROX |
Shranjevanje in rok uporabnosti
Komplet je treba hraniti pri -20 ± 5 ℃.Takoj ga je treba shraniti v termostatskem hladilniku -20 ℃.Rok uporabnosti je 2 leti, če je shranjen v primernem stanju.
